nachweis von prostataspezifischen transkripten in regionären lymphknoten von patienten mit...

Nachweis von prostataspezifischen

Transkripten in regionären Lymphknoten

von Patienten mit Prostatakarzinom

U. Fiedler, A. Manseck, R. Kranz, M. Wirth

Klinik und Poliklinik für Urologie

Universitätsklinikum der TU-Dresden

Metastasierung beim PCa

Lymphknoten 69 %

Knochen 68%

Lunge 48%

Leber 33%

Eble 1993

Diagnose der Lymphknoten-Metastasierung

Serum-PSA, cT, Gleason Score

Bildgebende Verfahren(CT, MRT, PET)

Histopathologie

Partin-Tabelle zur Beurteilung des Lymphknotenbefalls, PSA >20 ng/ml

Wahrschein-lichkeit %

cT1a cT1b cT1c cT2a cT2b cT2c cT3a0

10

20

30

40

50

60

2-45

67

8-10

Gleason-Score

klinisches Tumorstadium Partin 1997

Sensitivität des Lymphknoten-Stagings

CT: 22% (Beer et al., 1992)

MRT: 26% (Beer et al., 1992)

OP+SS: 80% (Beer et al., 1992)

Immunszintigraphie: 52-62% (Lamb et al., 1998)

Molekularbiologischer Nachweis von PCa-Zellen

Nachweis von prostataspezifischer mRNA

DNA prostata-spez. mRNA

ProteinRibosom

ZytoplasmaZellkern

mRNA

Nachweis prostataspezifischerTranskripte mittels RT-PCR

Aufschluß des Lymphknoten- Gewebes

Isolierung der Gesamt-RNA

DNase-Behandlung

Umschreibung in cDNA

Transkript-spezifische PCR

AAA

mRNA

cDNA

PCR

AAA

AAA

AAATTT

Prostataspezifische Genprodukte

PSM (Prostata SpezifischesMembranantigen)

PSA (Prostata Spezifisches Antigen)

Serinprotease

Lokalisation: Serum

Größe: 34 kDa

Transkripte: PSA mRNA

Folathydrolase

Lokalisation: Plasmamembran

Größe: 94 kDa

Transkripte: PSM mRNA PSM’ mRNA PSM’’ mRNA

PSM-Gen und PSM-Transkripte

19 Exons, 20 Introns

Genstruktur

PSM’ 2387 bp (Su et al., 1995)

X

PSM - 2653 bp (Israeli et al., 1993)

PSM-Variante (Bzdega et al., 1997)

XDeletion von Exon 18 (657-688)

Deletion im Exon 1 (114-380)

RNA-Isolierung aus Lymphkno-tengewebe und Kontroll-PCR’s

Universitätsklinikum Dresden

1µg RNA verschiedener Lymphknoten

1 2 3 4 5 6 7 8 9

1: 123 bp DNA-Standard2-5, 6-9: Lymphknoten

Gesamt-RNA GAPDH-RT-PCR

RT-PCR zum Nachweis von PSM-Transkripten in Lymphknoten

Universitätsklinikum Dresden

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

1-3, 5-7: Lymphknoten RNA

8: pos. Kontrolle (LNCaP RNA)

9: neg. Kontrolle

10: 123 bp DNA-Standard

Nachweis von PSA-Transkripten in regionären Lymphknoten

Universitätsklinikum Dresden

n RT-PCR-PSA + RT-PCR-PSA -

* 2 histologisch neg. LK, 2 vorbehandelte Patienten Sensitivität: 70,5 %, Spezifität 100 %

PCa 54 12 42

RCC 3 0 0

kein Ca 2 0 0

PCa/N+ 17 12 5*

PCa/N- 37 0 37

Nachweis von PSM-Transkripten in regionären Lymphknoten

Universitätsklinikum Dresden

n RT-PCR-PSM + RT-PCR-PSM -

* histologisch neg. LK, Sensitivität: 94,1%, Spezifität: 5,4%

PCa 54 51 3

RCC 3 3 0

kein Ca 2 0 0

PCa/N+ 17 16 1*

PCa/N- 37 35 2

Nachweis von PSM’-Transkripten in regionären Lymphknoten

Universitätsklinikum Dresden

n RT-PCR-PSM’ + RT-PCR-PSM’-

PCa 54 32 22

RCC 3 2 1

kein Ca 2 0 0

PCa/N+ 17 15 2 *

PCa/N- 37 17 20

* histologisch neg. LK, Sensitivität: 88,2%, Spezifität: 54%

PSA-Werte nach RPE

Universitätsklinikum Dresden

RT-PCR PSA p. O. +

PSA + /12

PSM - /3

PSM’ + /32

PSA - /42

PSM + /51

p. O. : 1-3 Wochen nach RPE

PSM’ - /22

Zusammenfassung I

Nachweis von Transkripten

in metastasierten Lymphknoten:

PSA - abhängig von Vorbehandlung

PSM - nicht spezifisch für PCa

PSM’ - besser als Histopathologie?

Zusammenfassung II

Verbesserung der Aussagekraft:

Quantifizierung der Transkripte

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