blutspendezentrale für wien, niederösterreich und burgenland nicht-invasive pränatale...
TRANSCRIPT
![Page 1: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/1.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung
RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA
32. Informationsgespräch der Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
![Page 2: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/2.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
GliederungNicht-invasive fetale RHD-Genotypisierung
Hintergrund Prävention der Anti-D Bildung in der Schwangerschaft,Management von Antikörperträgerinnen in der
Schwangerschaft
Standard-Prozedere und fetale Genotypisierung im Vergleich
Grundlagen der nicht-invasiven fetalen Gen-Diagnostik
Zuverlässigkeit der Methode: Sensitivität und Spezifität
1
2
3
4
![Page 3: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/3.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Bei RhD-negativen Schwangeren:Prävention der Anti-D-Immunisierung
Kein Immunisierungsrisiko bei RHD-negativen Feten
Nutzen fetaler RHD-BestimmungWann interessiert der kindliche RhD-Faktor?
Bei Antikörperträgerinnen:Nachweis des fetalen RHD-Genotyps
HDFN-Risiko nur bei RHD-positiven Feten
1
![Page 4: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/4.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Prävention der Anti-D-ImmunisierungStandards bei Schwangerschaften RhD-negativer Frauen1
- 28. SSW: Anti-D Immunglobulin
- Bei RhD-positiven Neugeborenen: Anti-D Immunglobulin < 72 h p. partum
1
1 KAV-Richtlinien
![Page 5: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/5.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Anti-D-immunisierte SchwangereVoraussage für die Entwicklung einer HDFN
nicht invasive Diagnostik (Mutter):
Anti-D-TiterbestimmungUltraschallfetales RHD-Screening (RHD-NIPD)
Invasive fetale Diagnostik: Diagnostik beim Kindesvater (?)
Amniozentese RhD undChoriozentese RHD-ZygotiebestimmungCordozentese (PCR)
1
![Page 6: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/6.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Pränatale Ultraschall – Diagnostik Nachweis von Ödembildung
1
Prof. J. DeutingerUniversitätsklinik für FrauenheilkundeMedizinische Universität Wien
![Page 7: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/7.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Pränatale Ultraschall – Diagnostik Nachweis von Ödembildung
Prof. J. DeutingerUniversitätsklinik für FrauenheilkundeMedizinische Universität Wien
1
![Page 8: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/8.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Hydrops fetalis, 11. – 14. SSWHydrops fetalis, 11. – 14. SSW
1
![Page 9: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/9.jpg)
A. cerebri media flow (MCA-PSV)
Flow velocity waveform in the fetal middle cerebral artery in a severely anemic fetus at 22 weeks (left) and in a normal fetus (right). In fetal anemia, blood velocity is increased
Doppler Ultraschalldiagnostik
Bei einer schweren fetalen Anämie (Hb <6g/dl) ist die Flussgeschwindigkeit in der A. cerebri media signifikant erhöht.Scheier M, Prediction of severe fetal anemia in red blood cell alloimmunization after previous intrauterine transfusions. Am J Obstet Gynecol. 2006 Dec;195(6):1550-6. Epub 2006 Jun 21
Collins CY, Evaluating suspected fetal anemia with Doppler ultrasound. J Reprod Med. 2005 Jun;50(6):379-82
![Page 10: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/10.jpg)
Anti-D-immunisierte SchwangereVoraussage für die Entwicklung einer HDFN
Nicht-invasive Diagnostik (Mutter):
Anti-D-TiterbestimmungUltraschallfetales RHD-Screening (RHD-NIPD)
Invasive fetale Diagnostik: Diagnostik beim Kindesvater (?)
Amniozentese RhD und ggf.Choriozentese RHD-ZygotiebestimmungCordozentese (PCR)
1
![Page 11: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/11.jpg)
Prävention der Anti-D-Immunisierung bei Schwangerschaft RhD-negativer Frauen
Nutzen fetaler RHD-Bestimmung(Wann) ist die Genotypisierung sinnvoll?
Bei Antikörperträgerinnen:Nachweis des fetalen RHD-Genotyps
Vermeidung von: passiver
Immunprophylaxe(humanes
Plasmapräparat)
Unabhängigkeit von der Verfügbar-keit von humanem Anti-D
Kosteneffizienz?
Frühzeitige Klarheit
Vermeidung von: invasiver Diagnostik und
assoziierter Risiken
2
![Page 12: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/12.jpg)
Entwicklung der RHD-NIPDInternationale Arbeitsgruppen
2
SAFE NoE - GruppeSpecial Non-Invasive Advances in Fetal and Neonatal Evaluation Network of ExcellenceSixth EC Framework Program
Gemeinsame ProtokolleMultizentrische EvaluierungStandardisierung der Prozesse
![Page 13: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/13.jpg)
Grundlage der GenotypisierungRHD- und RHCE-Gen
Daniels G. Human Blood GroupsDaniels G. Human Blood Groups3
RHD negativRHD negativ RHD positiv (heterozygot)RHD positiv (heterozygot) RHD positiv (homozygot)RHD positiv (homozygot)
![Page 14: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/14.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
LO, Y.M.D. et al. 1997. Presence of fetal DNA in maternal plasma and serum. Lancet 350: 485–487.
FINDINGS: Fetus-derived Y sequences were detected in 24 (80%) of the 30 maternal plasma samples, [...] None of the 13 women bearing female fetuses, and none of the ten non-pregnant control women, had positive results for plasma, serum or nucleated blood cells.
INTERPRETATION: Our finding of circulating fetal DNA in maternal plasma may have implications for non-invasive prenatal diagnosis, and for improving our understanding of the fetomaternal relationship.
Fetale Genotypisierung aus maternalem PlasmaLo et al. weisen DNA männlicher Feten in maternalem Plasma nach
3
![Page 15: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/15.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Zellfreie fetale DNAZellfreie fetale DNASynzytiothrophoblast als Ursprung der fetalen DNASynzytiothrophoblast als Ursprung der fetalen DNA
Kumpel et al. Transfusion 2008
3
![Page 16: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/16.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Anteil fetaler DNA an der zellfreien mütterlichen DNA
Die cffDNA-Menge ist abhängigvom Gestationsalter des Feten
Die DNA-Menge liegt zum Zeitpunkt der Untersuchungteilweise nahe dem stochastischen Bereich der rqPCR.
DNA-Qualität: die cffDNA ist stark fragmentiert
3
![Page 17: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/17.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
C. Ellen van der Schoot
Konzentration der cffDNAKonzentrationsunterschiede bei gleichem Gestationsalter
3
![Page 18: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/18.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Studien zur RHD-NIPDReview
4
![Page 19: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/19.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
4
Studien zur RHD NIPDErgebnisse von Sanquin, NL
![Page 20: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/20.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Kontrolle für die Amplifikation fetaler DNABeispiele
Y-chromosomale Marker
Genetische Polymorphismen
Epigenetik
Lo et al. 1998 SYRChin and Lo 2003 SYRRijnders et al. 2004 SYRAvent and Chitty 2006 SYR
Lee et al. 2002 HLA-DQLegler et al. 2002 RHCE, C, E, cVan der Schoot et al. 2003 insertion/deletionBrojer et al. 2005 insertion/deletion
Chan et al. 2006 RAASF1A4
![Page 21: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/21.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Kontrolle für die Amplifikation fetaler DNASensitivität der Methoden
Zuverlässigkeit der Methode ist abhängig von:
- geeignete Amplifikationskontrollen für fetale DNA
- geeignetes Entscheidungsschema
Das Verfahren muss ausreichend sensitiv sein, jeden RHD-positiven Feten richtig zu typisieren.
Falls zu wenig fetale DNA vorhanden ist, muss das erkannt werden.
4
![Page 22: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/22.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Amplifikation fetaler DNASpezifität der Methoden
Falsch positive Ergebnisse sind nicht kritisch:
Bei vermeintlich RHD-positiven Feten würde der Schwangeren eine nicht indizierte Anti-D-Prophylaxe verabreicht werden.
4
![Page 23: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/23.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
K.C. Allen Chan et al. Hypermethylated RASSF1A in Maternal Plasma: A Universal Fetal DNA Marker that Improves the Reliability of Noninvasive Prenatal DiagnosisClinical Chemistry 2006;52(12):2211-2218
BstU I methylation-sensitive restriction enzyme CG’CG, GC’GC
Fetale DNA-MethylierungUniversaler fetaler DNA-Marker für nicht-invasive Diagnostik
4
![Page 24: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/24.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
EukaryontenEpigenetik - GenexpressionHypermethylierung führt zur Suppression der
GenExp.
ProkaryontenSchutz vor DNA anderer Organismen Methylierung blockiert Enzym-Schnittstelle
eigener DNA- fremde (Bakteriophagen-) DNA wird zerstört
DNA-Methylierungin vivo-Bedeutung der DNA-Methylierung
4
![Page 25: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/25.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Enzymatische Verdauung der mütterlichen Plasma-DNA
fetale Methylierung blockiert die Restriktionsschnittstelle
die methylierte fetale Gensequenz bleibt erhalten
die maternale Sequenz wird zerstört
Die Menge der fetalen DNA kann gemessen werden
DNA-Methylierungin vitro-Bedeutung für die fetale Diagnostik
4
![Page 26: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/26.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Amplifikationskontrolle für fetale DNAmethyliertes fetales RAASF1A
Abb.1: Komplette Verdauung der maternalen DNAAbb.2: Inkomplette Verdauung der maternalen DNA
![Page 27: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/27.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
RHD-NIPD SAFE-Protokoll
Abb.3: RHD negativer männlicher Fetus Abb.4: RHD positiver männlicher Fetus
![Page 28: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/28.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Abb.5: RHD positiver weiblicher Fetus Abb.4: RHD positiver männlicher Fetus
RHD-NIPD SAFE-Protokoll
![Page 29: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/29.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Amplifikationskontrolle für fetale DNAmethyliertes fetales RAASF1A
Abb.1: Komplette Verdauung der maternalen DNAAbb.2: Inkomplette Verdauung der maternalen DNA
![Page 30: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/30.jpg)
Entscheidungsbaum bei Verwendung von RASSF1A und ACTB für das Prä-natale RHD-Screening nach Chan et al.Clinical Chemistry 2006;52(12):2211-2218
4
![Page 31: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/31.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Frühzeitiger Ausschluss RHD-negativer Feten
Vermeidung invasiver Diagnostik
ZusammenfassungNicht-ivasive pränatale RHD-Diagnostik bei Antikörperträgerinnen
![Page 32: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/32.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
ZusammenfassungNIPD: Kriterium zur Indikationsstellung der Anti-D-Prophylaxe
4
Hohe Sicherheit gegenüber falsch positiven Ergebnissen
Vermeidung unnötiger Anwendung von humanem Anti-D
Unabhängigkeit von der Verfügbarkeit von Anti-D
![Page 33: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/33.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
Elisabeth Schwartz-Jungl1
Dieter Schwartz1
Claudia Hobel2
Christof Jungbauer2
W. R. Mayr1,2
RHD-NIPD Arbeitsgruppe
Josef Deutinger3
Peter W. Husslein3
1 Universitätsklinik für Blutgruppenserologie und Transfusionsmedizin, Medizinische Universität Wien2 Österreichisches Rotes Kreuz, Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland3 Universitätsklinik für Frauenheilkunde, Medizinische Universität Wien
![Page 34: Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland Nicht-invasive pränatale RHD-Bestimmung RHD-Genotypisierung zellfreier fetaler DNA 32. Informationsgespräch](https://reader036.vdokument.com/reader036/viewer/2022062512/55204d7d49795902118ce2ac/html5/thumbnails/34.jpg)
Blutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland
www.blut.at www.roteskreuz.at
www.blut.at www.roteskreuz.at
Österreichisches Rotes KreuzBlutspendezentrale für Wien, Niederösterreich und Burgenland