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CO-IMMUNOPRÄZIPITATION
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EIN PROTEINGEMISCH….
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…WIRD MIT ANTIKÖRPERN VERSETZT…
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…DIESE BINDEN SPEZIFISCH AN DAS „KÖDERPROTEIN“,…
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…WELCHES WIEDERUM MIT DEM „BEUTEPROTEIN“ ASSOZIIERT IST…
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DIE ZUGABE SOG. BEADS…
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PROTEIN A BZW. G BINDEN AN ANTIKÖRPER
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…FÄNGT DIE GANZE MEUTE EIN…
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…NUR NOCH ABZENTRIFUGIEREN, UND VOILÀ!
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FAZIT
Vorteile: Der Standard zum Nachweis von Protein-Protein-
Interaktion Kann zum Nachweis der De-novo-Biosynthese
von Proteinen genutzt werden
Nachteile: Begrenzte Verfügbarkeit von spezifischen
Antikörpern Auftreten des sog. Prozoneneffekts erschwert
Durchführung
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DER PROZONENEFFEKT
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MUTAGENESE-METHODEN
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SINN UND ZWECK
Ziel: Erzeugung neuartiger Proteine durch Mutagenese, Verbesserung bereits bekannter Proteine
Zwei Möglichkeiten: Zufällige Mutagenese Gezielte Mutagenese
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GEZIELTE MUTAGENESE
Mit Hilfe rekombinanter Gentechnik gezielte Veränderung der DNA
Drei Arten von gezielten Veränderungen: Deletion Substitution Insertion
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DELETION
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DELETION
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3‘3‘
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SUBSTITUTION
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5‘
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INSERTION
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5‘
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5‘3‘
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3‘
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INSERTION5‘ 5‘
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3‘3‘
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VIELEN DANK FÜR DIE AUFMERKSAMKEIT
ENDE