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Nationaler BHV-1-Ringvergleich 2003
Doreen Reichelt, Birgit Goerl und Martin BeerInstitut für VirusdiagnostikFriedrich-Loeffler-InstituteBFAV Insel Riems
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Vorschau
Rückschau und Proben
Konventionelle Serologie
Markerdiagnostik
Schlussfolgerungen
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Nationaler und europäischerBHV-1 Ringtest 2001
positiv negativ
- hohe Sensitivität: gB-blocking ELISAs/neue indirekte ELISAs
- geringe Laborunterschiede bei ELISA-Systemen
- NT in zahlreichen Untersuchungs- stellen wenig sensitiv
- große Laborunterschiede bei NT
- „alte“ indirekte ELISAs wenig sensitiv
- Markerdiagnostik wenig sensitiv
-Testunterschiede bei ELISAs (Chargen und/oder Hersteller)
Ziel 2003: Laborvergleich mit BHV-1-“Routinediagnostik“
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003Proben (1-20 oder 20 –1)
Probe Herkunft/Art BHV-1-AK BHV-1-gE-AK
R1 1:64-Verdünnung Positivserum in Negativpoolserum ++ ++R2 1:2 Verdünnung von R1 in Negativpoolserum + +R3 1:2 Verdünnung von R2 in Negativpoolserum + +/-R10 Positives Referenzserum (F; SBES 380 1/2) +++ +++R15 Positives Referenzserum (F; SBES 380 2/2) +++ +++R16 Positives Referenzserum (F; SBES 382 2/2) +++ +++R17 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1145 ++++ + R18 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1139 ++++ +/-R19 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1795 ++++ +R20 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1673 ++++ +/-R21 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1152 ++++ +R22 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1796 ++++ ++R24 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1416 ++++ ++ R25 Vakzineprüfung Riems Tier Nr. 1508 ++++ +++R31 negatives Kontrolltier Riems (Alma) - -R32 negatives Kontrolltier Riems (Berta) - -R33 Bulle „Landser“ (B65/02-268), akute BHV-1 Inf. + +R35 Bulle „Tutor“ (B65/02-270), akute BHV-1 Inf. +/- +/-R36 Bulle „Rudnik“ (B65/02-271), akute BHV-1 Inf. +/- +/-R40 Biofakt orinject, (B37/02_1) - -
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (2)gB-blocking-ELISAs
- 100 % richtig bewertet- 6 verschiedene Chargen
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (3)gB-blocking-ELISAs
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (4)Indirekte ELISAs („Vollvirus“-Antikörper)
- 89 % richtig bewertet, 16 aus 20 >= 90%- 9 (alte?) verschiedene Chargen- OD-Differenzen beachten bei schwach positiven Proben
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (5)Indirekte ELISAs („Vollvirus“-Antikörper)
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (6)gE-blocking-ELSIAs
- 72 % richtig bewertet, 13 aus 30 >= 75%- mind. 11 verschiedene Chargen
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (7)gE-blocking-ELSIAs
- 70 % richtig bewertet (ohne R40), 6 aus 11 >= 75%- mind. 7 verschiedene (alte?) Chargen- 3x R1 negativ oder fraglich- Prototyp: 90% richtig bewertet !
70%
*
* gE-Prototyp
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (8)Neutralisationstest
- 88 % (ohne M) richtig bewertet, 16 aus 26 >= 90%- 7x R1 und/oder R2 nicht detektiert- 4x Kurzprotokoll (davon 3x R1 und/oder R2 nicht detektiert)- Probleme mit R40
88%(ohne M)
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (9)Testvergleich
0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
NTgB
_1gB
_2gB
_3gB
_4
VV_2
aVV
_2b
VV_3
gE_1
gE_2
% r
icht
ig b
ewer
tet (
Mitt
elw
erte
)
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BHV-1: humorale Immunantwort
Wic
htig
e B
HV
-1-A
ntik
örpe
r-in
duzi
eren
de P
rote
ine
gB
gD
gC
gE
gG
Stärke der humoralen Immunantwort
Antikörper nach 8-10 Tagen nachweisbar
Antikörper nach 10-14 Tagen nachweisbar
Antikörper nach 10-14 Tagen nachweisbar
Antikörper nach 14-35(?) Tagen nachweisbar
neutralisierende Antikörper
neutralisierende Antikörper
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0
10
20
30
40
50
60
70
80
90
100
Test ACharge
1
Test ACharge
2
Test ACharge
3
Test ACharge
4
Test BCharge
1
Sensitivität (n = 40)
Spezifität (n = 140)
Spez
ifitä
t bzw
. Sen
sitiv
ität i
n %
Chargenprüfung 2003: gE-blocking-ELISAs
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Nationaler BHV-1-Ringtest 2003 (9)
Laborvergleich
Konventionell
Marker
unterdurchschnittlich
ELISA: 7 NT: 7
ELISA: 6
Nicht gehäuft in einem Labor !
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Zusammenfassung und Ausblick
Keine Probleme bei konventioneller BHV-1-Serologie
NT: überraschend gute Ergebnisse, nur wenige „Ausreißer“
Markerdiagnostik: akzeptable Ergebnisse, verbesserte „Test- und Chargengleichheit“
Insgesamt: Hohes Niveau der BHV-1-Serodiagnostik, nur einzelne Untersucher mit Schwächen bei bestimmten Testsystemen
Ringtest 2004: Schwerpunkt Milchserologie und Virusnachweis
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Danksagung
Dr. König, Dr. Dedek, Dr. Jungblut, Dr. Götzmann, Dr. Böttcher, Dr. Riebe, Dr. Körber, Fa. Pourquier, Fa. Dr. Bommeli AG, Fa. IDEXX
Probenmaterial
Vielen Dank für Ihre Mitarbeit !