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Kursus inHistopathologie
Allgemeines
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I. Bestandteile des Kursus:
Präparate zur- Allgemeinen Pathologie (n = 31)- Speziellen (Organ)Pathologie (n = 23)
II. Ziel des Kursus:
Wiederholung von:- Allgemeiner Pathologie- Allgemeiner Organpathologie (große Organsysteme)- Histologie (sehr begrenzt jeweils zur Einführung)
in der Prüfung findet ein Gespräch statt, in dem allgemeines medizinisches Verständnis erwartet wird;
es ist nicht das Ziel Histopathologen auszubilden!
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III. Prinzip des Kursus:
- auf PowerPoint-Folien werden die wichtigsten Punkte für jedes Präparat nach folgendem Schema gegeben:
- Diagnose- Entität- allgemeine Pathologie (welchem Kapital zugehörig)- Ätiologie- Pathogenese- pathologisch-anatomische Befunde (inkl. Bildern)- histopathologische Befunde (inkl. Bilder)
- es wird ferner eine schematische Zeichnung angeboten- danach Mikroskopieren, das Anfertigen einer eigenen -
naturalistischen - Zeichnung wird wärmstens empfohlen- die Textfolien finden sich im Internet- die gesamten PowerPoint-Präsentationen auf den
Computern im Institut- für Fragen stehen die Mitarbeiter / -innen zur Verfügung
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IV. vom Einsenden einer Gewebeprobe bis zur histo-logischen Diagnose
A. Tätigkeiten beim Einsender
- Gewinnung der Probe:- möglichst aussagekräftige Lokalisationen- Übergang in das gesunde Gewebe mit einsenden
(vor allem bei Tumoren dringend erforderlich)
- Größe der Probe ist entscheidend, um eine schnelle Fixation zu erreichen und damit die Autolyse zu verhindern (Würfel von 1 cm Kantenlänge, wenn eine Scheibe, dann maximal 1 cm dick)
- aussagekräftiger Vorbericht, konkrete Fragestellungen !- merke: die Diagnosen sind immer nur so gut wie der
Vorbericht !!
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• gesamtes Organ oder Tumor
• in dieser Größe auf keinen Fall zu verwenden
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• aus der Gesamt-probe wird eine etwa 1 cm dickeScheibe heraus-geschnitten
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• Gewebescheibe
• sie wird weiter zerkleinert
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• es sollte eine Gewebeprobe mit einer max. Dicke - und wenn möglich auch Kanten-länge - von etwa1 cm resultieren
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A. Tätigkeiten beim Einsender (Forts.)
- Formalinfixierung:- Formaldehyd ist ein Gas, das in 37%iger wässriger
Lösung (Formalin) in den Handel kommt - Verdünnung auf 5 bis 10% Endkonzentration
- Verhältnis Gewebe zu Formalin wie 1 : 10 (das For-malin verbraucht sich bei der Fixation!)
- evtl. kann man das Gewebe fixieren (24 Stunden), dann das Formalin abschütten und mit sehr wenigFlüssigkeit versenden (siehe dazu auch Homepagedes Instituts);
- keine Formalinfixierung wenn:- eine Störung des Kohlenhydratstoffwechsels ver-
mutet wird (KH sind wasserlöslich)- Fixierung in Alkohol (Brennspiritus, Parfüm), aber
sehr kleine Blöcke herstellen (evtl. zwei Proben ge-winnen > Formalin- und Spezialfixierung)
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• Verbringen der Probe in Formalin
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B. Tätigkeiten beim Pathologen (= Herstellung derhistologischen Schnitte)
1. um dünne Schnitte herstellen zu können, muß das Gewebe in einen festeren Zustand überführt werden,dazu kann man es:
- einfrieren (Gefrier- / Kryostatschnitte- Einbetten in - Paraffin
- Kunststoff
2. bei hydrophoben Einbettungsmedien (Paraffin) muß das Gewebe entwässert werden (aufsteigende Alko-holreihe)
3. keine Entwässerung wenn:eine Störung des Fettstoffwechsels untersucht werden soll (Lipide sind alkohollöslich), dann Gefrier-schnitte und Spezialfärbung
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• zur weiteren Ver-arbeitung wird aus dem fixier-ten Gewebe-block nochmals eine kleinere Pro-be herausge-schnitten
• und in Einbettung-kapseln ver-bracht
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• die Gewebekap-seln werden dannin einem Einbet-tungsautomatenvon der wässri-gen Phase bis ingeschmolzenes Paraffin verbracht
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• als nächster Schritt folgt das „Ausgießen“ derProben
• an einer Ausgieß-station
• die flüssiges Par-affin liefert
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• die mit Paraffin getränkte Gewe-beprobe liegt in einer Edelstahl-wanne
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• die Probe wird mitflüssigem Paraffinbedeckt
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• die ehemalige Ein-bettungskapsel wird aufgelegt
• alle Teile werden anschließend ge-kühlt, damit das Paraffin erstarrt
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•• das Gewebe liegtals schneide-fertiger Paraffin-block vor
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• der Block wird in einem Mikrotomeingespannt
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• mit Spezialmes-sern werden Schnitte mit einerDicke von 2 µm hergestellt
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B. Tätigkeiten beim Pathologen (= Herstellung derhistologischen Schnitte) (Forts.)
4. Gewebe schneiden (auf einem Mikrotom):Schnittdicken
- Gefrierschnitt (10 - 20 µm)- Paraffinschnitt (02 - 04 µm)- Kunststoffschnitte (01 - 02 µm)- Ultradünnschnitte für EM (bis 50 nm)
5. Schnitte färben:da die meisten Farbstoff wasserlöslich sind muß derSchnitt vom Einbettungsmedium (Paraffin) befreit und rehydriert werden (absteigende Alkoholreihe)
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• das Färben der Schnitte erfolgt bei uns von Hand in Färbe-küvetten
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• nach dem Heraus-lösen des Par-affins mittels Xylol und Über-führen in das wässrige Medium
• erfolgt die Färb-ung in einer Färbereihe mit Blockschalen fürdie einzelnen Färbelösungen
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• Teile der Färbe-reihe für die Hämalaun-Eosin-Färbung
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B. Tätigkeiten beim Pathologen (= Herstellung derhistologischen Schnitte) (Forts.)
Übersichtsfärbungen:
Hämalaun - Eosin (HE)Hämalaun färbt das Chromatin (DNS) des Kernes
blau an = KernfärbungEosin fäbt das Eiweiß von Zytoplasma und extra-
zellulärer Matrix unterschiedlich stark rot an
Giemsa-Färbung (wie die zytologischen Färbungen, z.B: nach Pappenheim)
Spezialfärbungen:zum Nachweis bestimmter Substanzgruppen,
z.B. nach van Kossa - Kalk (eine Versilberung)Kongorot - AmyloidFettrot - Lipide
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B. Tätigkeiten beim Pathologen (= Herstellung derhistologischen Schnitte) (Forts.)
6. Schnitte eindecken: erneutes Entwässern, Eindeckmedium, Deckgläschen
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• nach erneutem Entwässern ein-deckeln mit einem Eindeck-medium (früher Kanadabalsam)
• damit ist das histologische Schnittpräparat fertig
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C. Tätigkeiten im Kursus (Mikroskopieren)
1. Präparat gegen das Licht oder besser noch ein weißes Blatt Papier halten
in der HE-Färbung bei hohem Zellreichtum eher blauer Farbton (z.B. lymphatisches Gewebe, bösar-tige Tumoren)
eher rötlicher Farbton bei grundsubstanzreichen Gewebe bzw. Zellen mit viel Zytoplasma (z.B. Leber)
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• Übersichtspräpa-rat
• wird von jedem Fall gezeigt, es dient der Orien-tierung im Schnitt
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C. Tätigkeit im Kursus (Mikroskopieren) (Forts.)
2. Lupenbetrachtung (5x-Objektiv)Überblick über das Präparat:
- gibt es unterschiedliche Anteile im Schnitt- wo ist die Veränderung- welches Gewebe / Organ könnte vorliegen- welche Stellen muß man genauer betrachten?
3. mittleres Trockensystem (10x-Objektiv)die Areale, die verändert erscheinen gezielt aufsuchen
- welches Gewebe / Zellen liegen vor (ist außer demortständigen Gewebe auch noch anderes Gewe-be zu finden - Tumor)
- Entzündungszellen- Veränderungen des Gewebes, worin bestehen die-
se Veränderungen?merke: mit dieser Vergrößerung sind die allermeisten
Präparate zu erkennen!!
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C. Tätigkeit im Kursus (Mikroskopieren) (Forts.)
4. starkes Trockensystem (40x-Objektiv)nur in Ausnahmen zu benutzen da eine Orientierungnicht möglich ist - man sieht den Wald vor lauter Bäumen nicht !
z.B. Suche nach Einschlußkörperchen, genaue Betrachtung von Erregern etc.
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D. Erstellen einer Diagnose (Forts.)
wie in der Makroskopie gibt es auch in Histologie unter-schiedliche Formen / Grade der Diagnose:
- morphologische Diagnose:katarrhalisch-eitrige Bronchopneumonie
- ätiologische Diagnose:mykotische Pneumonie
eine ätiologische Diagnose, die allein auf Übersichtsfärbun-gen beruht, kann höchstens grobe taxonomische Anga-ben machen (parasitäre, mykotische etc.)
für eine genauere Diagnose bedarf es der Immunhistologieoder der Insitu-Hydridisierung
deshalb behilft man sich häufig damit, daß man wie folgt formuliert: „Bild wie bei einer Staupe-Virus-Infektion“
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Aufbau des Kursus
Allgemeine Pathologie (n = 31)
- Stoffwechselstörungen inkl. Nekrose 8- Kreislaufstörungen 4- Entzündungen 9- Störungen des Wachstums 2- Tumoren 8
Spezielle Pathologie (n = 23)
- Lunge 7- Niere 6- Leber 2- Pankreas, Dünndarm 2- Endokrinium 1- ZNS 5
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Ende
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