978 :FRANKE und H6RENZ, P r o t h r o m b i n b e s t i m m u n g . Klinische Wochenschrift

v e r m e h r t e n P r o l a n a u s s e h e i d u n g der I - typophyse, u n d das H o r m o n t r i t t im U r i n der b e t r o f f e n e n P a t i e n t e n zutage . W e n n die Milz, e n t s p r e c h e n d der a n d e r e n Erkl~t rungsm6g l i ehke i t v o n SAUERBRUCH u n d KNAKE, P r o l a n zers t6r te , so w~ire ein A n s t e i g e n des H o r m o n s im U r i n sofor t n a c h der S p l e n e k t o m i e zu e rwar t en .

Es w a r urspr f ingl ich me ine Abs ich t , diese Z u s a m m e n - h~nge im E x p e r i m e n t we i t e r au i zuk~ren . D u t c h den IKriegs- a u s b r u c h w u r d e die A r b e i t vo rze i t ig u n t e r b r o c h e n . Infolge- dessen i s t a u c h die Zah l de r u n t e r s u c h t e n U r i n e yon G e s u n d e n u n d S p l e n e k t o m i e r t e n verh/ i l tn ism/iBig ger ing gebl ieben, die Ve r suche k o n n t e n n i c h t m e h r m a l s w i e d e r h o l t u n d die H o r m o n - verh~tl tnisse de r f r i sch o p e r i e r t e n P a t i e n t e n n i c h t wel te r ver- fo lg t werden . A u c h die L i t e r a t u r wurde aus d iesen Gr f inden n u r bis z u m J a h r e 1939 ber f icks ich t ig t . Die Be funde m u g t e n w a h r e n d eines F r o n t u r l a u b s z u s a m m e n g e s t e l l t werden .

Zusamme~/a~sung: I n F o r t s e t z u n g e iner f r f iheren A r b e i t aus unse r e r K l i n i k w e r d e n U r i n e y o n G e s u n d e n u n d splen- e k t o m i e r t e n P a t i e n t e n au f i h r e n G e h a l t a n g o n a d o t r o p e m H y p o p h y s e n v o r d e r l a p p e n h o r m o n u n t e r s u c h t .

E s zeigte s ich ein wesen t l i ehe r U n t e r s c h i e d in der GrbBe be ide r W e r t e .

Die in der L i t e r a t u r zu dieser F r a g e vo r l i egenden ]3efunde w e r d e n z u s a m m e n g e s t e l l t u n d m i t den e igenen verg l ichen .

Aus a l l em e r g i b t s ich eme Bes t / i t i gung der yon SA~JER- m~ucH u n d KNAKE m i t g e t e i l t e n Versuchsergebn isse .

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ZUR KLINISCHEN BRAUCHBARKEIT NEUERER PROTHROMBINBESTIMMUNGSMETHODEN.

Yon

HANS FRANKE u n d GERHARD HORENZ. Aus der Medlzinischen Universitats-Poliklimk Konigsberg i. Pr.

[Dlrektor: Prof. Dr. BRUNS).

I m Z u s a m m e u h a n g m i t der schne l len E n t w i c k l u n g des V i t a m i n K-Begr i f fes wurde der D i a g n o s t i k der h / imor rhag i - schen D i a t h e s e n wieder v e r m e h r t e ]3each tung zuteil . N a e h d e m b e k a n n t e n M o r a w i t z s c h e n B l u t g e r i n n u n g s s c h e m a i s t die S teI Iung des P r o t h r o m b i n b e i m G e r i n n u n g s v o r g a n g genau def in ier t . N e b e n der B e s t i m m u n g der T h r o m b o c y t e n z a h l spie len in der. k l in i schen D i a g n o s t i k die B l u t u n g s - u n d Ge- r i n n u n g s z e i t e n eine wesen t l i che Rolle, zuwei len a u c h die T h r o m b o s e z e i t (lY][ORAWITZ u n d JeRGENs) u n d die R e t r a k - t ionszei t . W a h r e n d die ange f f i h r t en M e t h o d e n a l lgemeiner N a t u r sind, so wird d u r c h die P r o t h r o m b i n b e s t i m m u n g e x a k t ein eng def in ie r t e r Teil der B l u t g e r i n n u n g erfaBt. Die hierff ir a n g e g e b e n e n M e t h o d e n y o n WARNER, BRINKHOUS u n d

SMITH sowie von THODARSEN s ind ftir k l in ische Zwecke re- l a t i v kompl iz ie r t , obwohl sie den Vor te i l h a b e n , zwischen P r o t h r o m b i n - u n d F i b r i n o g e n m a n g e l zu di f ferenzieren. W i r h a b e n n u n e iugehende ve rg l e i chende U n t e r s u c h u n g e n m i t im nach fo lgenden aufge f i ih r t en n e u e r e n P r o t h r o m b i n b e s t i m - m u n g s m e t h o d e n d u r c h g e t i i h r t , besonde r s u n t e r d e m Ge- s i c h t s p u n k t eines m6g l i chs t schnel len , p r a k t i s c h e in fachen u n d d e n n o c h e x a k t e n Arbe i t sganges . W i r g ingen zun~chs t s t r eng n a c h de r Or ig ina lvo r sch r i f t vo r u n d u n t e r s u c h t e n n e b e n den E i n z e l f a k t o r e n Verbes se rungsm6g l i ehke i t en .

Je n a c h der v o r h a n d e n e n B l u t m e n g e i s t die E i n t e i l u n g in Makro- u~d Mikromethoden zweckm~iBig. Von den Makro- m e t h o d e n l~itlt s ich f iber die P r o t h r o m b i n b e s t i m m u n g s - m e t h o d e n a c h DAM u n d GLAVlND folgendes sagen : Die Me thode i s t z e i t r a u b e n d u n d u m s t ~ n d l i c h bis zur E r m i t - t e lung der gee igne ten T h r o m b o k i n a s e k o n z e n t r a t i o n , bei der das B l u r in 3 M i n u t e n g e r i n n t (nach e n t s p r e c h e n d e r Formel) . H i n z u k o m m e n als Feh le rque l l en un te r sch ied l i che Akt ivi t~i t der Hepar ine , mengenm~13ige U n g e n a u i g k e i t e n bei der B lu t - a b n a h m e u n d sehr un te r sch ied l i che T h r o m b o k i n a s e a u s b e u t e abh~ingig yon de r T o u r e n z a h l be im Zent r i fug ieren . W a h r e n d bei 250o T o u r e n (IO M i n u t e n lang) sich n u r ger inge T h r o m b o - k i n a s e m e n g e n absehe iden , e rh i e l t en wir wesen t l i ch s t a rke re T h r o m b o k i n a s e , wenn wir m i t 2 Gewich t s t e i l en Ringer - losung zen t r i fug ie r ten , wobei die T h r o m b o k i n a s e e twas mi lehig a u s s a h u n d so den G e r i n n u n g s p u n k t besser e r k e n n e n lieB. Als W a s s e r b a d e m p f i e h l t s ieh f ibr igens bei a l len M e t h o d e n ein Glas m i t pa ra l l e l en W~inden wegen der ein- Iacheren L i c h t b r e e h u n g . H/ imoly t i sehe Seren ve rz6ge r t en die Ger innung , G e r i n n u n g s s t S r u n g e n d u t c h Calciumver~inde- r u n g e n b le iben unber i i cks ich t ig t . SchlieBlich m a c h t die Be- scha f fung v o n M e n s c h e n h i r n f r i sch sezier ter Le ichen i m m e r wieder aus /tuBeren Gr f inden Schwier igkei ten , die n a t u r - gem~tB noch grSBer sind, w e n n ke ine p a t h o l o g i s c h e n I n s t i t u t e a m Or t e sind.

Bei de r Quicksehen Methode i s t es u n b e d i n g t erforder l ich, dal~ jede T h r o m b o k i n a s e vo r ih re r d i a g n o s d s c h e n Verwen- d u n g e r s t a n e inem gesunden P l a s m a ge t e s t e t wird, worauf bere i t s CAROLI hinwies. A u c h bei s t a r k e r e n T h r o m b o k i n a s e - k o n z e n t r a t i o n e n d i f fe r ie r ten die P r o t h r o m b i n z e i t e n noch deut l ich . Feh le rque l l en s ind gegeben in der A r t des Zen t r i - fugierens, im r e l a t i v schne l len A l t e r n der T h r o m b o k i n a s e im t r o c k e n e n u n d besonders im gel6s ten Z u s t a n d , bei u n g e n a u e n W a s s e r t e m p e r a t u r e n , d u t c h Vernach l~ss igung des F ib r inogen- einflusses u n d in der A u f b e w a h r u n g s z e i t sowie T e m p e r a t u r des O x a l a t p l a s m a s (deut l iche P r o t h r o m b i n v e r m i n d e r u n g be- sonders bei Z i m m e r t e m p e r a t u r ) . l~ber e rheb l iche P r o t h r o m - b i n a b n a h m e d u r c h L a g e r u n g des P l a s m a s b e r i c h t e n aueh REINHOLD, VALENTINE u n d FERGUSON. I m Gegensa tz zu HEPDING u n d MOLL f a n d e n wir bei A u i b e w a h r u n g bei o - - 5 ~ eine deu t l i che A b n a h m e de r ge l6s ten T h r o m b o k i n a s e - A k t i v i - t~t , die n a c h 5 Tagen eine e twa doppe l t so hohe P r o t h r o m b i n - zei t ergab. W e s e n t l i e h besser i s t das T r o c k e n p u l v e r ha l t ba r . H~tmolyt ische Seren s ind zu verwerfen . KA~:MP u n d GREEN- WOOD sowie BERGAm, Scoz u n d GuzzI sch lugen geringe Mod i f i ka t i onen der Qu iekschen Me thode vor .

Mi t sehr g u t e m Er fo lg h a b e n wir im Gegensa tz zur Ori- g ina lvo r sch r i f t eine Kaninchenlungenthrombokinase b e n u t z t , f iber de ren B e r e i t u n g v. JENNY u n d M i t a r b e i t e r ki i rzl ich be- r i c h t e t e n u n d wobei die A u s b e u t e e twa d o p p e l t so groB ist. (Ganz abgesehen davon , d a b m a n von d e m e inze lnen K a n i n - chen auch gleichzei t ig n e b e n d e m H i m noch die L u n g e n zur T h r o m b o k i n a s e h e r s t e l h n g b e n u t z e n kann . ) Die d u r c h H/ imo- g lob inspu ren bed ing t e e twas r6 t l i che F a r b e der Lungen - t h r o m b o k i n a s e begf ins t ig t infolge des s t / i rkeren F a r b k o n t r a s t - t e s t s die E r k e n n u n g der Ge r innung . A u c h die K o a g u l a t i o n sehe in t p to tz l i cher e inzu t r e t en . E i n wei te re r Vor te i l i s t die lange H a l t b a r k e i t . Bei e n t s p r e c h e n d e r H a l t b a r k e i t s p r f i f u n g k o n n t e n wir z. B. se lbs t a m 15. Tag n o c h ke ine Wi rkungs - a b n a h m e f inden (bei o - - 5 ~ a u f b e w a h r t ) . Ff i r die q u a n t i - t a t i v e A u s w e r t u n g der P r o t h r o m b i n w e r t e in P r o z e n t e n zur N o r m f e r t i g t en wir eine Verg le i chskurve an, die e twas f lacher ver l ief als bei der V e r w e n d u n g yon K a n i n c h e n h i r n t h r o m b o - Mnase, U n t e r diesen B e d i n g u n g e n i s t also die Quicksche

Jg. 20, Heft 39 27. September I94I SCHRODER und BRAUN-STApPENBECK, Vitamin C. 979

M a k r o m e t h o d e sehr b r a u c h b a r , e r fo rde r t wenig Zei t u n d i s t r e l a t i v l e ich t auszuf f ih ren m i t d e m Vorte i l p l6 tz l ich e i n t r e t e n - de r u n d g u t s i c h t b a r e r Ger innung . N a c h uns e r en E r f a h r u n g e n i s t jedenfa l l s die V e r w e n d u n g yon K a n i n c h e n l u n g e n t h r o m b o - k inase wegen der sch laga r t ig e i n t r e t e n d e n Ger innung , der ge r ingen Feh le rb re i t e u n d der l a n g e n H a l t b a r k e i t wesen t l i ch zweckmaBiger .

Von den besonde r s ffir die P / id ia t r i e geschaf fenen Mikro- methoden prf i f ten wi t zun/ ichs t die Mikromethode yon QuicK. Diese h a t den Nachte i l , d ab bei M e h r f a c h b e s t i m m u n g e n die P r o t h r o m b i n z e i t u m 3 - - 4 S e k u n d e n d i f fe r ie r t u n d die Er - k e n n u n g de r G e r i n n u n g se lbs t bei d u r c h f a l l e n d e m L i c h t groBe Schwier igke i t en bere i te t . Die Fiechtersehe 2tlikromethode, die a n sich eine Modi f ika t ion der Qu ickschen M a k r o m e t h o d e ist, e rweis t sich als wesen t l i ch geeigneter . Mi t s t / i rkeren T h r o m - b o k i n a s e k o n z e n t r a t i o n e n is t die K o a g u l a t i o n bei ger ingerer S t r e u u n g der E inze lwer t e gu t e r k e n n b a r . Feh le r e n t s t e h e n d u r c h die Y e r w e n d u n g yon G e s a m t b l u t a n Stelle yon P lasma , wobei d u r c h l angsa lnes Aufz iehen des Blu tes d u r c h B i l d u n g eines B lu tge r innse l s die P r o t h r o m b i n z e i t d u t c h V e r w a s c h u n g des K o a g u l a t i o n s e i n t r i t t e s v e r / m d e r t wird. /~OLLER emp~ahl h ie rgegen eine P i p e t t e zur besseren V e r m i s c h u n g des Blu tes m i t d e m Oxala t , die sich bei u n s e r e n A r b e i t e n ebenfa l l s be- w/ ihr te . Schl iegl ich is t auch h ie rbe i wieder die B e a c h t u n g e iner genauen W a s s e r b a d t e m p e r a t u r erforder l ich.

E t w a s nms tXnd l i che r a n d d u t c h die N i c h t b e a c h t u n g des y o n der T e m p e r a t u r u n a b h ~ n g i g e n G e r i n n u n g s o p t i m u m s tm- g e n a u e r e n M e t h o d e is t die M i k r o m e t h o d e yon KATO. I n I e t z t e r Zei t gab auch HAUSER eine M i k r o m e t h o d e an, wobei er die T h r o m b o k i n a s e aus F r a n e n m i l c h hers te l l t , die eben- falls n u r schwer zu e r h a l t e n ist. Schliel31ich t ibe rpr f i f t en wir die Mikromethode yon PLUM u n d DAM. A uf die Schwierig- k e i t e n der Bescha f f ung yon M e n s c h e n h i r n t h r o m b o k i n a s e wurde bere i t s h ingewiesen. Bei i m m e r h i n be t rXcht l i cher S c h w a n k u n g de r E inze lwer t e w a r e n die yon den A u t o r e n a n g e g e b e n e n P r o t h r o m b i n z e i t e n n u r d u r c h A u s t e s t u n g der H e p a r i n k o n z e n t r a t i o n zu erre ichen, d a die H a n d e l s h e p a r i n e sehr un t e r s ch i ed l i chen W i r k u n g s g r a d h a b e n . RERABEK will diese Feh le rque l l en d u t c h N a t r i u m c i t r a t ausgle ichen, was unseres E r a c h t e n s n u r b e d i n g t gel ingt . Bee in t r / i ch t ig t werden die 1Resultate bei PLUM a n d DAM a u c h du rch die Ger innsel - b i l d u n g be im B l u t a u f z i e h e n u n d d u r c h F i b r i n k l f i m p c h e n be im S c h w a n k e n des ReagensglXschens . Dera r t ige Bes t im- m u n g e n mfissen s t e t s ve rwor fen werden .

Ep ik r i t i s ch 1/iBt sich f iber die n e u e r e n P r o t h r o m b i n - b e s t i m m u n g s m e t h o d e n folgendes fes t s te l l en : Alle Makro- u n d M i k r o m e t h o d e n bes i t zen den g le ichen Nach te i l a n d die Feh le rque l len , die s ich aus t ier T h r o m b o k i n a s e b e s c h a f f u n g , -be re i t ung u n d - h a l t b a r k e i t ergeben. Die K a n i n c h e n h i r n - t h r o m b o k i n a s e m u g bei ih re r b e g r e n z t e n H a l t b a r k e i t u n d ih re r d i f f e ren ten A k t i v i t ~ t s te t s a n n o r m a l e n Seren ge t e s t e t werden. Ffir die Mi t t e i l ungen in der L i t e r a t u r i s t es in j e d e m Fal le erforder l ich, ffir jede M e t h o d e u n t e r den jeweil igen A r b e i t s b e d i n g u n g e n s t e t s die n o r m a l e n Zei ten a n z u g e b e n bzw. d u r c h Verg l e i chsku rven den p r o z e n t i s c h e n Teil der N o r m anzuff ihren .

Wesen f l i ch besser als die K a n i n c h e n h i r n t h r o m b o k i n a s e erwies sich uns die K a n i n c h e n l u n g e n t h r o m b o k i n a s e m i t besserer H a l t b a r k e i t u n d besse rem K o a g u l a t i o n s p u n k t . Die u n t e r s c h i e d l i c h e n A n t i t h r o m b i n e i g e n s c h a f t e n hande ls f ib l i cher H e p a r i n e e r fo rde rn gleichfalls e r s t eine A u s t e s t u n g a m ge- s u n d e n Menschen , u m ze i tgerech te G e r i n n u n g s e i n t r i t t e zu erzielen, die a u c h u n t e r e i n a n d e r ve rg l i chen werden k6nnen . Die M a k r o m e t h o d e n h a b e n den Vor te i l gr6Berer Genau igke i t m i t de r M6gl ichke i t yon Doppe l t - u n d M e h r f a c h b e s t i m m u n g e n yore gle ichen Serum, w/ ih rend die F e h l e r m 6 g l i c h k e i t e n u n d S c h w a n k u n g s b r e i t e n bei den M i k r o m e t h o d e n ungle ich gr6Ber sind.

Zusammen]assung: Die n e u e r e n Makro- u n d Mikro- p r o t h r o m b i n b e s t i m m u n g s m e t h o d e n w u r d e n in ve rg l e i chenden U n t e r s u c h u n g e n h in s i ch t l i ch ih re r p r a k t i s c h k l in i schen B r a u c h - b a r k e i t u n t e r s u c h t . U n t e r Hinweis au f die zah l re i chen Fehler - m6g l i chke i t en bei den e inze lnen M e t h o d e n erwies sich yon den M a k r o m e t h o d e n die Prothzombinbestimmung nach QuicK

als die geeignets te , zuma l w e n n a n Stelle der v o m A u t o r b e n u t z t e n K a n i n c h e n h i r n t h r o m b o k i n a s e eine K a n i n c h e n - lungenthrombokinase b e n u t z t wird. Von den M i k r o m e t h o d e n h a l t e n wir die A r b e i t s v o r s c h r i f t e n yon FICHTER fur die zweck- m/il3igste.

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V I T A M I N C - G E H A L T D E S B L U T E S U N D S E R U M E I S E N S P I E G E L .

Von

HERMANN SCHRSDER u n d MAGDA BRAUN-STAPPENBECK. Aus der I. Medizinisehen Klmik der Umversltat Munchen

(Direktor: Prof. Dr. STEPP).

Die e r s t en g r u n d l e g e n d e n U n t e r s u c h u n g e n f iber die F r a g e der E i s e n r e s o r p t i o n i m O r g a n i s m u s s t a m m e n yon HOCHHAUS u n d QUINCKE aus d e m J a h r e 1896. Sie b e s t i m m t e n den Eisen- g e h a l t y o n S e r i e n s c h n i t t e n aus d e m M a g e n - D a r m t r a c t u s d u r c h eine m i k r o a n a l y t i s c h e M e t h o d e u n d s te l l t en test , d ab das E i sen wahr sche in l i ch im o b e r s t e n A b s c h n i t t des Df inn- d a r m s r e so rb i e r t u n d d u r c h den D i c k d a r m wieder ausgeschie- den wird. Das E i sen wi rd n u r in zweiwer t iger F o r m resorb ie r t , wie HEUBNER bere i t s i m J a h r e 1912 au f G r u n d t h e o r e t i s c h e r l '3ber legungen folgerte. Den endgf i l t igen Beweis hierff i r b r a c h t e HEILMEYER d u r c h fo lgenden V e r s u c h : E r gab e in u n d de r se lben V e r s u c h s p e r s o n a n e inem Tag 220 m g E i sen als F e r r o v e r b i n d u n g u n d v e r a b r e i c h t e a m fo lgenden Tag die gleiche Menge als Ferr ie isen. Die B e s t i m m u n g des Se rum- e i sengeha l t e s e r g a b e n e inen s te i len Ans t i eg d u r c h die Fer ro- eisenzufuhr, w~ihrend sich die Serumeisenkurve nach Ferri- eisen nur wenig tinderte. Da das Nahrungseisen sowohl in Fer ro - wie in F e r r i f o r m vor l iegt , muB eihe vo l l s tgnd ige I )be r - f f ih rung des d re iwer t igen E i sens in die F e r r o f o r m s t a t t f i n d e n ; dies gesch ieh t wah r sche in l i ch m i t Hilfe des r e d u z i e r e n d e n V i t a m i n C im Magen sowie im obe ren Teil des Df innda rms . Die R e d u k t i o n s k r a f t ' d e s V i t a m i n C i s t so groB, dab es sogar in s c h w a c h s a u r e r L 6 s u n g die F e r r o i o n e n vo r o x y d a t i v e n Ver- g n d e r u n g e n zu b e w a h r e n ve rmag . Das V i t a m i n C der N a h r u n g wi rd im Magen yon d e m phys io log i schen Sch le im a b s o r b i e r t u n d vo r O x y d a t i o n gescht l tz t , wie Ver suche yon MAttLO er- geben h a b e n . E r ~ e r s u c h t e den phys io log i schen R e s o r p t i o n s - v o r g a n g d u t c h fo lgenden Ve r such zu erklXren:

Eine Ioproz. Mucingallerte wird mit 1/100-Ferrichloridl6sung fiberschichtet. An der Grenzfl~che en t s t eh t ein Niederschlag einer Eisenmucinverbindung. Dieser verhinder t die Diffusion des Eisens in das Innere der Gallerte. Ersetz t man die Ferrichloridl6sung du tch eine Aquimolekulare Ferrichloridl6sung, so en ts teh t an der GrenzflAehe kein Niedersehlag. Die Ferroehloridl6sung diffundiert langsam in die Gallerte. Eisen ist in den oberen Schichten nachweis- bar. In Gegenwart yon Vitamin C jedoch erfolgt die Diffusion der Ferroehloridl6sung schnell bis in die unters ten Schichten der Gallerte. Dieser Versuch entspricht, zum Tell wenigstens, den Ver- hAltnissen im Magen.

I n de r D f i n n d a r m s c h l e i m h a u t s ind v e r h ~ l t n i s m ~ g i g hohe Mengen r eduz i e r ende r S u b s t a n z e n , vo r a l l em V i t a m i n C, ge- spe icher t , so dab n i c h t alle A c h y l i k e r a n e iner E i s e n m a n g e l - a n g m i e e r k r a n k e n miissen. I m D i c k d a r m f i n d e t ke ine Vi t - a m i n C-Reso rp t ion s t a t t (SCHROEDER u n d LIEBICH). LUCKSCH g l aub t , d a b das V i t a m i n C n u r d u r c h A n r e g u n g der Magen-