1 aktuelle aspekte der zöliakie herbert wieser deutsche forschungsanstalt für lebensmittelchemie...
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1
Aktuelle Aspekte der Zöliakie
Herbert Wieser
Deutsche Forschungsanstaltfür Lebensmittelchemie
Lichtenbergstr. 4, 85748 Garching
in Zusammenarbeit mit der
Europäischen Arbeitsgruppe für die Prolaminanalyse und -toxizität
und den
Partnern des BMBF-Leitprojekts „Zöliakie“
2
Definition
Zöliakie = Einheimische Sprue = Glutensensitive Enteropathie:
Lebenslange Intoleranz gegenüber Speicherproteinen (Gluten) aus Weizen, Roggen, Gerste und Hafer (?), die mit einer schweren Schädigung der Dünndarmschleimhaut (Zottenatrophie) einhergeht und zur Malabsorption von essentiellen Nährstoffen führt
Darmzottennormal zöliakiegeschädigt
3
Symptome/Therapie
Häufige Symptome
Durchfälle Anämien
Erbrechen Avitaminosen
Leibblähungen Knochenschmerzen
Blässe Osteoporose
Gedeihstörungen Muskelschwund
Wesensveränderung Gewichtsverlust
Lebenslange strikte „glutenfreie Diät“
= keine Produkte aus Weizen, Roggen,
Gerste und Hafer außer reiner Stärke
(Tägliche Aufnahme von Gluten < 20 mg)
Therapie
4
Chronik der Zöliakie
200 a.d. Patienten mit chronischem Durchfall = „koiliakos“
1888 Beschreibung der Zöliakie, Behandlung durch Diät
Toxische Wirkung von „Gluten“ „glutenfreie Diät“1950
1959
1960
1961
1970/71
1984/88
1997
Peptisch-tryptisches Glutenhydrolysat = toxisch
Zöliakie und Einheimische Sprue = identische Krankheit
Diagnose durch Dünndarmbiopsie
Toxizitätsprüfung von Proteinen (in-vivo, in-vitro)
Strukturaufklärung toxischer Peptide
Gewebetransglutaminase = Autoantigen
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Diagnose
Empfehlungen der ESPGAN
1970
Symptome
1. Biopsie
Atrophie
glutenfreie Kost
keine Beschwerden
glutenhaltige Kost
3. Biopsie
Atrophie
Diagnose „Zöliakie“
1990
Symptome
1. Biopsie
Atrophie
glutenfreie Kost
Diagnose „Zöliakie“
IgA anti-Gliadin +
IgA anti-TG +
2. Biopsie
Regeneration
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Aktuelle Aspekte
• Häufigkeit
• Antigen „Gluten“
• Autoantigen „Transglutaminase“
• Mechanismus
• Analytik
• Toxische Strukturen
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Häufigkeit
1 : 200
Eisberg-Modell nach Logan (1991)
Familien = 1 : 10, weiblich: männlich = 2:1
Genetische Disposition (HLA-DQ2) = 1 : 5
1) Diagnostizierte Zöliakie
2) Nicht-diagnostizierte Zöliakie (flache Mukosa)
3) „Latente“ Zöliakie (normale Mukosa, erhöhte Ig-Werte)
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Klassifizierung der Getreidemehlproteine
Weizenprolamine = GLIADINE
Weizengluteline = GLUTENINE
Gliadine + Glutenine = GLUTEN (Kleber)
Stoffwechselproteine Speicherproteine
wasserlöslich salzlöslich alkohollöslich unlöslich
ALBUMINE GLOBULINE PROLAMINE GLUTELINE
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Aminosäurezusammensetzung der Prolamine
mol-% (Ausschnitt)
(Wieser et al., 1980)
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Homologe Gruppen der Speicherproteine
Gruppe Mrx10-3 Weizen Roggen Gerste
HMW 67-88 HMW-Glutenine (G) HMW-Secaline (G) D-Hordeine (G)
MMW 34-55 -Gliadine (P) -Secaline (P) C-Hordeine (P)
LMW 28-39(70)
-Gliadine (P)-Gliadine (P)LMW-Glutenine (G)
--40k-Secaline (P)-75k-Secaline (G)
--Hordeine (P)
B-Hordeine (G)
HMW = hochmolekular (P) = ProlamineMMW = mittelmolekular (G) = GlutelineLMW = niedermolekular
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2-Dimensionales Modell eines -Gliadins
HA
II
VV
NH
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L
H H H Q Q Q Q Q Q P S
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120 15
015
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163 24
925
0
262
200
H
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P
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PQ
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QP
Y PP
Q
Q PQ
PY
Q PQ
PQ
I QS Q AQ Q Q QQ Q QQ Q T QL Q LI Q QQ IL
Q PN
SQ
QP
Q
Q
(Müller, Wieser 1997)
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Toxizität der Kleberproteine
-/+
13
Toxizität von Hafer
1995 Finnische Studie(Janutuinen et al.)
92 Zöliakiekranke, 6-12 Monate
45: ca. 50 g Hafer pro Tag
47: 0 g Hafer pro Tag
Biopsie
Ergebnis: nicht toxisch !
1996 Irische Studie I(Srinivasan et al.)
10 Zöliakiekranke, 3 Monate
50 g Hafer (Kölln) pro Tag
Biopsie, immunol. Unters.
Ergebnis: nicht toxisch !
2003 Norwegische Studie(Lundin et al.)
19 Zöliakiekranke, 3 Monate
50 g Hafer pro Tag
Biopsie, immunol. Unters.
Ergebnis:
1 Patient: Villusatrophie
5 Patienten: -Interferonanstieg
2003 Irische Studie II(Kilmartin et al.)
17 Zöliakiekranke
Gewebekultur-Test
PT-Avenin, PT-Gliadinimmunol. Untersuchung
Ergebnis: nicht toxisch !
Bis 1995 umstritten
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Autoantigen Gewebetransglutaminase (tTG)
tTG2) R-CO-NH2 + H2O R-CO-OH + NH3
tTG1) R-CO-NH2 + H2N-tTG R-CO-NH-tTG + NH3
LQLQPFPQPQLPY
LQLQPFPELPY
LQLQPFPQLPY
H2N-tTG
(Fleckenstein et al., 2004; Wieser et al., 2004)
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Hypothesen zum MechanismusEnzymdefekte (Peptidasemangel)
Lektinartige ReaktionenAdenovirus-12-Infektion
Primäre (Auto-) Immunreaktionen(Glutenpeptide/ Transglutaminase)
(Schuppan, Dieterich, 1999)
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Ausgangslage
A. CODEX STAN 118-1981:
Bestimmung des N-Gehaltes (Kjeldahl)
Grenzwert: 0,05 % N in der TM
B. Draft Revised Standard (2000)
Extraktion mit 60 %igem Ethanol ELISA
Grenzwert: 20 mg Gluten/kg TM (von Natur aus „glutenfrei“)
200 mg Gluten/kg TM („glutenfrei“ gemacht)
Gluten = 2 x Prolamin
C. Codex Food Labelling Standard (2006 ?)
Gluten = Allergen; Grenzwert 0
Prolaminstandard, Antikörper, erhitzte Lebensmittel, Hydrolysate
Probleme
Analytik „Gluten“
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ELISA-Kit „Gluten“ (Skerritt u. Hill, 1991)
Kalibrierkurven für Gliadine verschiedener Weizenarten(Wieser, Seilmeier, 1999)
18
Herstellung eines Gliadinstandards
Weizenkörner
Lipide
AlbumineGlobuline
Rohgliadin
Gliadin
Standard
vermahlen, entfetten
Salzextraktion
60 % Ethanol
Ultrafiltration,Lyophilisation
Chemische CharakterisierungZertifizierung (IRMM)
500 g
(E. Berghofer, Wien; R. van Eckert, Graz; H. Wieser, Garching)
30 kg
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Herstellung eines Antikörpers/ELISA
Immunogen: Roggenprolamine (Secaline)
Antikörper: monoklonal (R5)
ELISA: Sandwich (R5 + R5-Meerrettichperoxidase)
Spezifität: Gliadin, Secalin, Hordein (kein Avenin !)Epitop: - QQPFP -
Nachweisgrenze: 3,2 µg Prolamin /kg
Wiederholbarkeit: 7,7 %
Reproduzierbarkeit: 8,1 %
(Valdes et al., 2003)
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Analyse von erhitzten Produkten (1)Einfluss von 2-Mercaptoethanol auf die
Kalibrierkurve des Gliadinstandards im R5-ELISA
(Garcia et al., im Druck)
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Analyse von erhitzten Produkten (2)
60 % EtOH 2-ME + GUA
M = Mehl = 100 %
Wiederfindung von Gliadin in erhitzten Weizenteigen
°C °C
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Analyse von erhitzten Produkten (3)
Probe Zusatz Gliadina Gliadin (EtOH) Gliadin (2-ME+GUA)
mg/kg mg/kg % mg/kg %
Maisbrotb Nr.
1 145,0 57,5 40 144,5 100
2 65,5 21,0 32 61,0 93
3 156,0 48,0 31 153,5 98
4 107,0 35,5 33 100,0 93
5 80,5 27,5 34 76,5 95
6 27,0 12,0 44 26,0 96
7 34,5 13,0 38 32,5 94
8 140,0 54,5 39 127,5 91
9 0,0 <1,5 - <1,5 -
10 0,0 <1,5 - <1,5 -a Gliadinstandard IRMM-480; Angaben entsprechen Gliadinprotein (= 86,4 % der Substanz).b Aus 10 g Mehl hergestellt und 10 min bei 240 °C verbacken.
Wiederfindung von Gliadin in Maisbrot
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Zusammenfassung Analytik
• Mit dem monoklonalen Antikörper R5 werden die Prolamine von Weizen, Roggen und Gerste mit hoher Spezifität und
Empfindlichkeit quantitativ erfasst.
• Der kombinierte Einsatz von 2-Mercaptoethanol und Guanidin erlaubt die vollständige Extraktion der Prolamine auch aus
erhitzten Produkten; die Effizienz des Antikörpers wird durch das Extraktionsmittel nicht beeinträchtigt.
• In naher Zukunft wird ein zertifizierter Gliadinstandard zur Verfügung stehen.
• Das entwickelte ELISA-System wurde in einem internationalen Ringtest erfolgreich getestet und vom „Codex Commitee on Methods of Analysis and Sampling (CCMAS)“ anerkannt. Seit kurzem sind kommerzielle Testkits erhältlich.
• Haferprolamine und Weizenglutenine werden nicht erfasst.
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BMBF - Ideenwettbewerb
BMBF - Leitprojekt
Entwicklung von
Weizen-, Roggen-,
und Gerstenproteinen
ohne Zöliakietoxizität
und deren Verwendung zur
Herstellung von Lebensmitteln
(http://vvgvg.org)
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Ziele
• Aufklärung toxischer Proteinstrukturen
• Eliminierung toxischer Strukturen durch Gentechnologie
• Produktion von zöliakieverträglichem, transgenem Weizen
• Produktion von backfähigem, transgenem Mais
• Produktion von zöliakieverträglichem Gluten durch transgene Hefe
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Partner
Wissenschaft Universität Hamburg
Institut für Allgemeine Botanik und Botanischer Garten(H. Lörz, D. Becker)
Technische Universität BerlinFachbereich für Lebensmittelwissenschaft und Biotechnologie(U. Stahl, F. Meuser)
St. Thomas´ Hospital, LondonRayne Institute(P.J. Ciclitira)
Deutsche Forschungsanstalt für Lebensmittelchemie, GarchingArbeitskreis Getreideproteine(H. Wieser)
Industrie Hauptsponsoren: Monsanto, Uniferm, Puratos, Bake Mark Verein zur Förderung und Verwertung von gentechnisch verbesserten
Getreideprodukten
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Teilprojekte Garching/London
• Identifizierung und Modifizierung toxischer Epitopeaus Gliadinen Immunmodulation ?
• Toxizitätsprüfung von Gluteninen Einsatz in glutenfreien Backwaren ?
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Toxizitätstests
In-vivo-Test (Instillation in den Dünndarm) 500 – 1000 mg
In-vitro-Test (Gewebekultur-Test) 1 mg
In-vitro-Test (Stimulation der T-Lymphozyten) 0,2 mg
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Zöliakieaktivität synthetischer Gliadinpeptide
(in vivo, Sturgess et al., 1994; in vitro, Shidrawi et al., 1995)
(in vivo, Marsh et al., 1995; in vitro, Maiuri et al., 1996)
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Stimulation der T-Lymphozyten durch Gliadinpeptide
Zöliakiespezifische Stimulation der T-Lymphozyten (in-vitro) durch Peptide aus -Gliadinen (57-68, 62-75) nach Desamidierung von Q65 E65 durch Transglutaminase
( 57 - 68 )
( Arentz-Hansen et al., 2000 )
( 62 - 75 )L Q P F P Q P E L P Y
P Q P E L P PY Q P Q L P Y
Q
! Kein Nachweis, dass diese Peptide in-vivo die Darmschleimhaut schädigen
! Keine systematische Untersuchung, welche Aminosäuren außer E65 für die stimulierende Wirkung essentiell sind
(Arentz-Hansen et al., 2000)
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Methoden (1)
Gliadinhydrolysat
Extraktion von Gliadin aus Weizenmehl der Sorte „Rektor“ mit 60 % (v/v) Ethanol
Partialhydrolyse von Gliadin mit trägergebundenem Pepsin und Trypsin( PT-Gliadin)
Synthetische Peptide
Gerät: Peptidsynthesizer (Applied Biosystems 431A)
Programm: Fmoc-Chemie, Small-Scale-Synthese (1 mmol/Aminosäure)
Reinigung: 1) C18-Kieselgel (25-40 µm), Glassäule 3 x 30 cm, ca. 20 °C2) C18-Kieselgel (5 µm), Stahlsäule 0,46 x 24 cm, 50 °C
Reinheitsprüfung: RP-HPLC an C18-Kieselgel
Identitätsprüfung: Massenspektrometrie (ESI-MS)
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Methoden (2)
Immunologische Untersuchungen
T-Lymphozyten: Isolierung von gliadinsensitiven T-Zelllinien und -klonen von ZöliakiepatientenStimulation: PT-Gliadin + Antigen-präsentierende Zellen (APC)Inkubation: T-Zellen + APC + Peptid (3,7 µmol/L) + 3H-Thymidin (18-48 h, 37 °C)Messung: Radioaktivität (cpm) cpm mit Peptid Stimulationsindex = SI > 2,0 = signifikante Wirkung
cpm ohne PeptidZytokine: ELISA
Toxikologische UntersuchungenPersonen: 4 erwachsene Zöliakiepatienten unter glutenfreier KostInstillation: 1 g PT-Gliadin, 100 bzw. 20 mg Peptid, gelöst in Wasser, 2 hBiopsie: Gewebeentnahme mit Quinton-Kapsel nach 0, 2, 4 und 6 hMessung: Enterozytenhöhe (ECH), Villushöhe (VH), Kryptentiefe (CD), Anzahl intraepithelialer Lymphozyten (IEL)
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Gewebeentnahme
Zellhöhe
IntraepithelialeLymphozyten
Villus-höhe
Krypten-tiefe
(Messung an mind. 10 Villi)
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Peptide
Toxikologische Untersuchung
G8 (-Gliadin 56-75)
C1 (ß-Casein 53-72)
Immunologische Untersuchung
G9 (-Gliadin 56-75, E65)
G5 (-Gliadin 56-68, E65)
G4 (-Gliadin 62-75, E65)
Peptides for T-Cell Stimulation
56 - 75, E 65 ) L PQ L Q P F Q P L P Y P Q P Q L P YG 9 E
56 - 68, E 65 )G 5
62 - 68, E 65 )G 4
G 4 - A 1
G 4 - A 2
G 4 - A 3
G 4 - A 5
G 4 - A 6
G 4 - A 7
G 4 - A 8
G 4 - A 9
G 4 - A 10
G 4 - A 11
G 4 - A 12
G 4 - A 13
G 4 - A 14
A
L PQ L Q P F Q P L P YE
P Q P L P Y P Q P Q L P YE
Q P L P Y P Q P Q L P YE
P P L P Y P Q P Q L P YE
P Q L P Y P Q P Q L P YE
P Q P P Y P Q P Q L P YE
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P Q P L P P Q P Q L P YE
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P Q P L P Y P Q P L P YE
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P Q P L P Y P Q P Q L YE
P Q P L P Y P Q P Q L PE
A
A
A
A
A
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A
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A
A
A
A
Peptides for T-Cell Stimulation
56 - 75, E 65 ) L PQ L Q P F Q P L P Y P Q P Q L P YG 9 E
56 - 68, E 65 )G 5
62 - 68, E 65 )G 4
G 4 - A 1
G 4 - A 2
G 4 - A 3
G 4 - A 5
G 4 - A 6
G 4 - A 7
G 4 - A 8
G 4 - A 9
G 4 - A 10
G 4 - A 11
G 4 - A 12
G 4 - A 13
G 4 - A 14
A
L PQ L Q P F Q P L P YE
P Q P L P Y P Q P Q L P YE
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A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
Peptides for T-Cell Stimulation
56 - 75, E 65 ) L PQ L Q P F Q P L P Y P Q P Q L P YG 9 E
56 - 68, E 65 )G 5
62 - 68, E 65 )G 4
G 4 - A 1
G 4 - A 2
G 4 - A 3
G 4 - A 5
G 4 - A 6
G 4 - A 7
G 4 - A 8
G 4 - A 9
G 4 - A 10
G 4 - A 11
G 4 - A 12
G 4 - A 13
G 4 - A 14
A
L PQ L Q P F Q P L P YE
P Q P L P Y P Q P Q L P YE
Q P L P Y P Q P Q L P YE
P P L P Y P Q P Q L P YE
P Q L P Y P Q P Q L P YE
P Q P P Y P Q P Q L P YE
P Q P L Y P Q P Q L P YE
P Q P L P P Q P Q L P YE
P Q P L P Y Q P Q L P YE
P Q P L P Y P P Q L P YE
P Q P L P Y P Q Q L P YE
P Q P L P Y P Q P L P YE
P Q P L P Y P Q P Q P YE
P Q P L P Y P Q P Q L YE
P Q P L P Y P Q P Q L PE
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
35
Toxikologische Untersuchung (1)
Enterozytenhöhe (ECH)(0 h vs. 4 h)
0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 40 4 0 4PTG G8 C1 PTG C1 PTG G8 C1 PTG C1
ECHPatient 1 Patient 2 Patient 3 Patient 4
G8 G8
******
******
****** ***
***
n.s
.
n.s
.
n.s
.
n.s.
PTG = peptisch-tryptisches Gliadinhydrolysat (Positivkontrolle)
G8 = Gliadinpeptid 56-75
C1 = Caseinpeptid (Negativkontrolle)
36
Toxikologische Untersuchung (2)
Villushöhe/Kryptentiefe (VH/CD)(0 h vs. 4 h)
PTG = peptisch-tryptisches Gliadinhydrolysat (Positivkontrolle)
G8 = Gliadinpeptid 56-75
C1 = Caseinpeptid (Negativkontrolle)
0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 40 4 0 4PTG G8 C1 PTG C1 PTG G8 C1 PTG C1
VH/CD
Patient 1 Patient 2 Patient 3 Patient 4
G8 G8
2.0
1.5
1.0
0.5
*** ***
******
******
******
n.s.
n.s.
n.s. n.
s.
37
Toxikologische Untersuchung (3)
Anzahl der Lymphozyten (IEL)(0 h vs. 4 h)
0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 4 0 40 4 0 4PTG G8 C1 PTG G8 C1 PTG G8 C1 PTG G8 C1
IEL Patient 1 Patient 2 Patient 3 Patient 4
PTG = peptisch-tryptisches Gliadinhydrolysat (Positivkontrolle)
G8 = Gliadinpeptid 56-75
C1 = Caseinpeptid (Negativkontrolle)
38
Immunologische Untersuchung (1)
Peptid SI IFNG9 ( 56-75) 60 1100G5 ( 56-68) 11 130G4 ( 62-75) 49 380
Peptid SI IFNG9 ( 56-75) 25 410G5 ( 56-68) 5 37G4 ( 62-75) 22 33
Peptid SI IFNG9 ( 56-75) 27 430G5 ( 56-68) 12 220G4 ( 62-75) 27 410
T-Zellklon Nr. 6
T-Zellklon Nr. 8
T-Zellklon Nr. 9
Sl = Stimulationsindex, IFN = -Interferon (pg/mL)
39
Immunologische Untersuchung (2)
Peptide
G 4 - A 1
G 4 - A 2
G 4 - A 3
G 4 - A 5
G 4 - A 6
G 4 - A 7
G 4 - A 8
G 4 - A 9
G 4 - A 10
G 4 - A 11
G 4 - A 12
G 4 - A 13
G 4 - A 14
A Q P L P Y P Q P Q L P YE
P P L P Y P Q P Q L P YE
P Q L P Y P Q P Q L P YE
P Q P P Y P Q P Q L P YE
P Q P L Y P Q P Q L P YE
P Q P L P P Q P Q L P YE
P Q P L P Y Q P Q L P YE
P Q P L P Y P P Q L P YE
P Q P L P Y P Q Q L P YE
P Q P L P Y P Q P L P YE
P Q P L P Y P Q P Q P YE
P Q P L P Y P Q P Q L YE
P Q P L P Y P Q P Q L PE
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
A
(-)--
-
--
-
--
+
++
+
SI/IFN
40
Immunologische Untersuchung (3)
+
+
+
+
+
+
-
-
Peptide SI/IFN
41
Zusammenfassung Toxikologie/Immunologie
Die in-vivo-Toxizitätsprüfung an vier erwachsenen Zöliakiepatienten hat gezeigt, dass das Peptid G8 ( 56-75) eine signifikante zöliakiespezifische Schädigung der Dünndarmschleimhaut hervorruft.
Die immunologischen Untersuchungen haben ergeben, dass das an Position 65 desamidierte Peptid G8 (G9) eine zöliakiespezifische Stimulation der T-Lymphozyten bewirkt. Für die Wirkung des Peptids sind die Positionen 62-71 essentiell.
P Q P L P Y P PE Q
42
Peptidbindungsstellen
43
Toxizitätsprüfung der HMW-Glutenine
1Dx5
1Dy10
90 785827
Bauplan
A B C
105 585
627A B C
Wiederkehrende Sequenzen
44
Preparation of Crude HMW Subunits
Flour (Rektor)
50 % 2-PrOH
(3x, RT)
Extract Residue
50 % 2-PrOH + DTE + Tris-HCl
(2x, 60 °C)
Extract Residue
Solubles Precipitate
washing, freeze-drying
HMW subunits
1Dx5 29.4 %1Bx7 36.7 %1By9 11.9 %1Dy10 22.0 %
acetone
45
RP-HPLC of Glutenin Fractions
Total glutenin subunits Crude HMW subunits
HMW 20 %
HMW 90 %
46
Characterisation of Purified HMW Subunits
RP-HPLC SDS-PAGE
47
ELISA-Result
Antibody Gliadin
R5 (Mendez et al., Madrid)a) Sandwichb) Competitive
0.09 %0.16 %
W6/8 (Ellis et al., London) 0.18 %
48
Peptic Tryptic Digest of HMW Subunits
Control of hydrolysis by RP-HPLC on C18 silica gel
1. HMW subunits (400 mg) + agarose-bound pepsin (1600 U) + HCl (pH 2, 20 mL)37 °C, 2 h – centrifugation
2. Supernatant +NaOH ( pH 7.8) + agarose-bound trypsin (10 U) 37 °C, 2 h+ HCl ( pH 7.0) – centrifugation – lyophilisation of supernatant
49
Stimulationstest an T-Lymphozyten
Patient FFIII HMW HMWtTGZB 11,1 2,6 1,4JB 6,2 2,0 2,0JD 3,7 3,4 3,3YR 12,5 1,0 3,0SB 1,3 3,1 1,3BL 90,0 12,1 7,7TS 6,1 3,7 3,9MH 4,3 0,3 0,2EL 11,9 1,5 2,2LN 4,0 1,0 1,1MT 67,0 Nd 4,2CM 11,0 3,5 5,2NL 21,5 1,0 0,7LB 3,4 1,0 1,0 13/14 7/13 8/14
Angegeben ist der Stimulationsindex (SI);SI>2 = signifikante Wirkung; Nd = nicht bestimmt.
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Ergebnisse ECH
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Ergebnisse VH/CD
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Ergebnisse IEL
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Zusammenfassung HMW-Glutenine
Die immunologischen und toxikologischen Untersuchungen haben ergeben, dass ein Gemisch aus den HMW-Untereinheiten Nr. 5, 7, 9 und 10 zöliakiespezifische Reaktionen hervorruft. Aus den Ergebnissen geht nicht hervor, welche der vier Untereinheiten zöliakieaktiv ist.
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Ausblick
Isolierung und Testung einzelner rekombinanter HMW-Untereinheiten aus transgenem Mais und transgener Hefe
Mais(Uni Hamburg)
Hefe(TU Berlin)
1Dy10 1Dx5
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Danksagung
Prolamin Working Group
Paul J. Ciclitira, LondonRenate van Eckert, GrazConleth Feighery, DublinEnrique Mendez, Madrid
BMBF-Projekt
Dirk Becker, HamburgPaul J. Ciclitira, LondonErika Hinzmann, BerlinFriedrich Meuser, Berlin
DFA
Wolfgang Engel, Ursula Schützler, Sibylle Suckart
Bundesministerium für Bildung und Forschung
Verein zur Förderung und Verwertung von
gentechnisch verbesserten Getreideprodukten