reaction no - applichem.com · die kjeldahl-methode wird heute zur stickstoffbestimmung auch in der...
Post on 06-Aug-2019
212 Views
Preview:
TRANSCRIPT
Proteaseinhibitoren
Biochemie ReAction No.3 3
Proteasen (auch Proteinasen) kommen in allen eukaryotischen Zellen und Bakterien zahlreich in verschiedenen Komparti-menten wie Cytosol, Mitochondrien, Vakuole, Lysosomen, ER oder im Extrazellularraum vor. Intrazelluläre Proteasen sind wesentlich an der Regulation von Synthese, Aktivierung und Abbau der Proteine beteiligt. Extrazelluläre oder sekretierte Proteasen sind prominent im Darmtrakt von Tieren oder als
Gold AB-HisDetect ist eine Fertiglösung mit Gold-markiertem anti-His-Tag-Antikörper. Damit werden ganz spezifi sch His-getaggte Proteine direkt auf dem Blot pink gefärbt. Das Färbeergebnis ist quantitativ und permanent. Gefärbtes Protein ist mit dem bloßen Auge erkennbar und kann mit einer einfachen Kamera oder einem Scanner aufgezeichnet werden.
¡ Nachweisgrenze im piko-molaren Bereich (vergleichbar ECL) ¡ Gefärbte Western-Blots in 60 Minuten ¡ Lumineszenz-Detektion entfällt
A B
Oft ähneln Molekülbereiche von Proteaseinhibitoren strukturellen Elementen der jeweiligen Proteasesubstrate. Inhibitoren binden mehr oder weniger spezifi sch, re-versibel oder irreversibel an ihre Ziel-Protease. Zwei Beispiele sind: (A) AEBSF hemmt entsprechende Proteasen irreversibel durch Sulfonierung einer funktionellen
Gruppe im katalytischen Zentrum. (B) Bestatin ähnelt einem Phe-Leu Dipeptid-Substrat, dabei enthält der erste Aminosäurerest eine -Hydroxygruppe, was zur ortsspezifi schen, kompetitiven Hemmung der entsprechen-den Aminopeptidasen führt.
Teil der Blutgerinnungskaskade. Verschiedene Gewebe oder Organismen enthalten sehr unterschiedliche Sätze von Proteasen. Das Wissen um die Protease-Zusammensetzung eines bestimmten Expressionssystems ermöglicht es zielgenau unerwünschte Protease-Aktivität während der gesamten Reinigung und Analyse von Proteinen zu unterbinden.
Beschreibung Produkthinweis/Ziel-Proteasen Bestell-Nr. Menge
AEBSF - Hydrochlorid BioChemica 4-(2-Aminoethyl)-benzolsulfonyl-fl uorid - HCl
Serin-Proteasen (Chymotrypsin, Kallikrein, Plasmin), Proteinase K, Trypsin
A1421,0250A1421,0500
250 mg500 mg
Antipain - Dihydrochlorid BioChemica
Serin-/Cystein-Proteasen, Trypsin-ähnliche Proteasen (Trypsin, Papain, Cathepsin B)
A2129,0010A2129,0025
10 mg25 mg
Aprotinin BioChemica Serin-Proteasen (Chymotrypsin, Kallikrein, Plasmin)
A2132,0025A2132,0100
25 mg100 mg
Bestatin - Hydrochlorid BioChemica
kompetitiver Inhibitor von Aminopeptidasen A2137,0025 25 mg
E-64N-(trans-Epoxysuccinyl)-L-leucin-4-guanidinobutylamid
Cystein-Proteasen (Papain, Bromelain, Ficin, Cathepsin B, H und L, Tumor-Cathepsin, Calpain, Streptococcus protease)
A2157,0005A2157,0010
5 mg10 mg
Leupeptin - Hemisulfat Serin- und Cysteinproteasen (Plasmin, Trypsin, Papain, Cathepsin B, Thrombin, Calpain)
A2183,0025 25 mg
Pepstatin A Pepsin, HIV- und MMTV-Protease, Cathepsin D, Renin
A2205,0025 25 mg
Protease Inhibitor Cocktail 6 His-Tag Prot
Gebrauchsfertige Proteaseinhibitor-Mischung. Optimiert für die Reinigung von His-Tag-Protein aus Zellextrakten. Enthält AEBSF, Bestatin, E-64, Pepstatin A und Phosphoramidon.
A7802,0001 1 ml
2 ReAction No.3 Biochemie
Das Wirkprinzip von Proteaseinhibitoren
Strukturen von (A) AEBSF - Hydrochlorid und (B) Bestatin - Hydrochlorid
Hat die Überexpression geklappt?Schnelle Färbung von überexprimierten His-Tag-Proteinen mit dem neuen Gold AB-HisDetect
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
Gold AB-HisDetect A9747,0030 30 ml
4 ReAction No.3 Zelkultur Zelkultur ReAction No.3 5
Neue Antibiotika für Zellkulturen – Alternative zu Pen:Strep
Verwandte Produkte für die Zellkultur
Holen Sie das Meiste raus aus der Transfektion!
Incubator-Clean™ und Incuwater-Clean™
Medium + DNA(oder RNA)
Medium + AppliFect LowTox
InkubationTest auf Genexpression nach 1 – 3 Tagen
Komplex auf Zellen geben
Mischen
CellCultureGuard enthält eine Kombination neuartiger Antibiotika zur Bekämpfung von Kontaminationen in Zellkulturen. Das Reagenz bietet zuverlässig Schutz gegen extrazellulär und intrazellulär wachsende Bakterien (inklusive Mycoplasmen), Protozoen und Pilzen (bes. Hefen). Damit ersetzt CellCultureGuard konventionelle Antibiotika wie Penicillin-Streptomycin, Gentamycin oder Amphotericin B.
AppliFect LowTox ist eine Weiterentwicklung herkömmlicher Reagenzien für die Liposomen-vermittelte Transfektion von Säugerzellen. Für nahezu alle gebräuchlichen Zelllinien getestet.
¡ Für höchste Transfektions-Effi zienz (bei minimalem zytotoxischem Effekt)
Incubator-Clean™ ist eine Sprühlösung zur Vermeidung von Kontaminationen in Zellkultur-Inkubationsschränken. Die Lösung verhindert das Wachstum von Pilzen, Schleimpilzen, Bakterien (und Sporen), Mycoplasmen und inaktiviert viele Viren.
Incuwater-Clean™. Das Wasser, das zur Einstellung der Luftfeuchtigkeit im CO
2-Inkubator benötigt wird, ist eine potentielle Quelle für Kontaminationen,
die sich im Inkubator verbreiten können.
Details zum Produkt und zur Anwendung: CellCultureGuard ist eine 100-fach konzentrierte sterile Lösung (1 ml CellCultureGuard zu 100 ml Zellkulturmedium). CellCultureGuard bleibt sieben Tage in Zellkulturen bei 37 °C stabil und entfaltet seine Aktivität. Lagertemperatur ist -20 °C.
A. Das schnelle Transfektions-Protokoll mit AppliFect LowTox
B. Overlay von Durchlicht und Fluoreszenzsignal von HEK293T-Zellen, die mittels AppliFect LowTox mit einem eGFP-Fusionsprotein transfi ziert wurden.
Details zum Produkt und zur Anwendung: Besprühen Sie den Innenraum von CO2
-Inkubatoren etwa jede zweite Woche mit Incubator-Clean™. Die aktiven Inhaltsstoffe sind quarternäre Benzylammonium-Verbindungen. Die Lösung ist bio-abbaubar und nicht giftig, enthält weder Quecksilber noch Formaldehyd, Phenol oder Alkohole.
Details zum Produkt und zur Anwendung: Wechseln Sie das Inkubator-Wasser alle zwei bis vier Wochen mit frischem, sterilem Wasser aus; geben Sie 10 ml Incuwater-Clean™ pro Liter Wasser zu.
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
CellCultureGuard A8906,0050 50 ml
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
Incuwater-Clean™100x-konzentrierte Lösung
A5219,0100 100 ml
Incubator-Clean™ A5230,0500 500 ml
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
AppliFect LowTox A9027,0001 1 ml
A B
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
AC-Trypsin – Lösung für die Zellkultur A8336,0500 500 ml
Trypsin 1 : 250 aus Schweinepankreas A4148,0025 25 g
Dimethylsulfoxid für die Zellkultur A3672,0100 A3672,0250
100 ml250 ml
L-Glutamin für die Zellkultur A3704,0100A3704,0500
100 g500 g
PBS Puffertabletten pH 7.4 (für 100 ml) A9162,0100 100 Tabletten
PBS Puffertabletten pH 7.4 (für 200 ml) A9177,0100 100 Tabletten
6 ReAction No.3 Mikroskopie und Histologie Reagenzien für die Lebensmittelanalyse ReAction No.3 7
Reagenzien für die klinische DiagnostikHistofi x® Formaldehydersatz
Die EU Verordnung der Kommission Nr. 605/2014 und Ergän-zung Nr. 2015/491 legt neue Vorschriften zur Einstufung und Kennzeichnung gefährlicher Stoffe und für Gefahren- und Sicherheitshinweise sowie die Verwendung dieser Stoffe fest.
Formaldehyd ist einer der Stoffe, die von dieser neuen Euro-päischen Gesetzgebung betroffen sind. Daher empfehlen wir die Verwendung alternativer Stoffe und kürzere Expositions-zeiten für die Benutzer dieser Substanz. PanReac AppliChem hat ein neues Produkt entwickelt, um die Ziele der neuen Verordnungen zu erreichen. Das neue Histofi x® Formaldehydersatz ist ein Fixiermittel auf Glyo-
Um die Zusammensetzung und Qualität garantieren zu kön-nen, unterliegen Milch und Milchprodukte während der Handhabung und Verarbeitung strengen analytischen Kontrollen. Die Verordnung (EG) Nr. 273/2008 der Kommission vom 5. März 2008 legt Parameter zur Bestimmung der Re-ferenzgrenzwerte und Referenzmethoden für die chemische, physikalische und mikrobiologische Analyse fest sowie für eine organoleptische Bewertung von Milch und Milchprodukten.
xalbasis, das bei histologischen Verfahren häufi g verwendet wird und die gesundheitlichen Gefahren für den Benutzer reduziert.
Einer der wichtigsten Parameter ist der Fettgehalt.Die Bestimmung des Fettgehalts ist aus folgenden Gründen äußerst wichtig:¡ Fettgehalt wirkt sich auf den Preis pro Liter Milch aus.¡ Zur Bestimmung ob Milch- oder Käseprodukte die
fest gesetzten gesetzlichen Werte einhalten.¡ Fettgehalt wird zur Einstufung der Milch zur Herstellung
von Milcherzeugnissen herangezogen.
Hauptvorteile:
P Nicht karzinogen
P Flexibel. Kompatibel mit unterschiedlichen Fixiermethoden. Konzentriertes, gebrauchsfertiges Produkt
P Packungen 1 und 5 Liter, passend für Ihre Labor-Anforderungen
P Geringere Geruchsbelastung im Vergleich zu Formaldehyd
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
Histofi x® Formaldehydersatz für die klinische Diagnostik 255805.2711255805.2714
1000 ml5 L
Histofi x® Formaldehydersatz gebrauchsfertig für die klinische Diagnostik 257157.1211257157.1214
1000 ml5 L
Bestimmung des Fettgehalts in Milchprodukten
MILCH KÄSE
Beschreibung Bestell-Nr.
Menge Gravi-metrische Methode(ISO 1211)
Butyro mter-Methode(Gerber-methode) (ISO 2446)
Gravi-metrische Methode(ISO 1735)
Butyrometer-Methode(Van Gulik-Methode) (ISO 3433)
Ammoniak 25 % (als NH3)
(Reag. USP, Ph. Eur.) für die Analyse121129 1000 ml,
2,5 L, 5 L P
Amylalkohol gemäß NF V 04-210 für die Analyse
125715 1000 ml P
Diethylether stabilisiert mit ca. 6 ppm BHT (Reag. Ph. Eur.) für die Analyse, ACS, ISO
132770 1000 ml, 2,5 L, 5 L P P
Ethanol 96 % v/v für die Analyse, ACS
131085 1000 ml, 2,5 L, 5 L P P
Salzsäure 25 % für die Analyse, ISO
133378 1000 ml, 2,5 L, 5 L P
Isoamylalkohol gemäß Gerber für die Analyse
121079 1000 ml, 2,5 L, 25 L P
Petrolether 40 – 60 °C für die Analyse, ACS, ISO
131315 1000 ml, 2,5 L, 5 L P P
Schwefelsäure 90 – 91 % gemäß Gerber für die Analyse
121010 1000 ml, 2,5 L, 5 L P
Schwefelsäure 62 % (d= 1.522) gemäß Van Gulik für die Analyse
173253 1000 ml, 2,5 L, 5 L P
Es gibt verschiedene Methoden zur Bestimmung des Fettgehalts in Milch und Käse.
Hier sind zwei typische Methoden:1. Mojonnier-Methode: Gravimetrische Methode, die
zur Extraktion des Fetts organische Lösungsmittel verwendet. Danach wird das Lösungsmittel abgezogen und der Fettgehalt durch Wiegen des trockenen Fett-extrakts bestimmt.
2. Gerber-Methode: Volumetrische Methode, die chemische Reagenzien verwendet (Schwefelsäure, Detergenzien), um die Emulsion aufzulösen und das Fett abzutrennen. Anschließend wird der Fettgehalt in einem speziellen Kolben gemessen (Butyrometer).
Gravi- Butyro mter- Gravi- Butyrometer-
MILCH KÄSE
Gravi- Butyro mter- Gravi- Butyrometer-
Foto
: ist
ockp
hoto
.com
© V
alen
tynV
olko
v
8 ReAction No.3 Reagenzien für die Lebensmittelanalyse
Gravimetrische Methode
Butyrometermethode
Reagenzien für die Lebensmittelanalyse ReAction No.3 9
+ Probe: 10 g Milch oder 1–3 g Käse+ 2 ml NH
3 25 % (für Milch) oder + 8 – 10 ml HCl 25 %
(für Käse) + Wärme+ 10 ml Ethanol+ 2 Tropfen Kongorot+ 25 ml Diethylether+ 25 ml Petrolether
+ 10 ml Schwefelsäure 90 – 91 % (d = 1,820 g/ml) für Milch oder 62 % (d = 1,522 g/ml) für Käse
+ 11 ml Probe (Milch) oder 3 g Probe (Käse)+ 1 ml Isoamylalkohol für Milch oder 1 ml Amylalkohol für Käse
Kolben schließen und schütteln
Kolben schließen und kräftig schütteln
Kolben für Sammlung des Fetts (d. h. Kochkolben)
Lösungsmittel abdestillieren und Rückstand wiegen
Zentrifugierenca. 3 min im
Wasserbad bei 65 – 60 °C
Schwefelsäure
Direkt ablesen: Fettsäule von
Milch oder Käse (4,5-1= 3,5 % Fett)
Wässrige Phase
!
Grenz-fl äche
! Lösungs-
mittel
!
}
Butyrometer DIN12836 zur Bestimmung des Fettgehalts nach Gerber
Stickstoffbestimmung nach Kjeldahl
Organischer Stickstoff wird in NH
4
+ überführtNH
3 wird abdestilliert und in
einer Vorlage aufgefangenStickstoffgehalt wird bestimmt
Aufschluss Destillation Titration
Kolben zur Fettextraktion(Mojonnier-Methode)
Foto: istockphoto.com © haoliang
Proteine sind für Menschen und Tiere unentbehrlich und sind in den meisten Lebens- und Futtermitteln enthalten (Säfte, Milchprodukte, Fleisch, Getreide). Tatsächlich ist der Proteingehalt eine der wichtigsten Angaben zum Nährwert eines Lebensmittels.
Mit der Kjeldahl-Methode kann der Proteingehalt in Lebens-mittelproben ermittelt werden. Sie basiert auf der Bestim-mung des Stickstoffs, der in allen Proteinen vorkommt.Die Kjeldahl-Methode wird heute zur Stickstoffbestimmung auch in der Umweltanalytik, der Forschung und Entwicklung, in der pharmazeutischen, chemischen und Kosmetikindustrie eingesetzt.
Die Kjeldahl-Methode besteht aus drei wichtigen Schritten:
1. Aufschluss: Die Probe wird bei 340 bis 370 °C mit Schwefel säure gemischt. Der organisch gebundene Stick-stoff wird in das Ammoniumion überführt. Organisch ge-bundener Kohlenstoff und Wasserstoff bilden Kohlendioxid und Wasser. Kaliumsulfat und Katalysatoren werden hinzu-gefügt, um den Siedepunkt von Schwefelsäure zu erhöhen und die Zeit für den Aufschluss zu verkürzen.
Protein (-N) + H2SO
4 " (NH
4)
2SO
4 + CO
2 + H
2O
Katalysator
2. Destillation: Vor der Destillation wird die saure Probe mit konzentrierter Natriumhydroxidlösung (NaOH) neutralisiert.Bei der Destillation werden die Ammoniumionen durch Reaktion mit den Hydroxidionen (OH-) des überschüssigen Natriumhydroxids in Ammoniakgas (NH
3) überführt:
(NH4)
2SO
4 + 2 NaOH " 2NH
3 (Gas) + Na
2SO
4 + 2H
2O
Der destillierte Ammoniak wird durch Einleiten von Dampf ausgetrieben und in eine Säurevorlage eingeleitet. Als Säure kann eine Borsäurelösung, Schwefelsäurelösung oder Salz-säurelösung verwendet werden, die das Ammoniak unter Bildung von Ammoniumionen auffängt.
3. Titration: Die Konzentration der Ammoniumionen in der Borsäurelösung wird mithilfe einer Säure-Base-Titration bestimmt. Hierzu werden in der Regel Natriumhydroxid-Standardlösungen verwendet.
Probe
10 ReAction No.3 Reagenzien für die Lebensmittelanalyse
Bei der Kjeldahl-analyse verwendete Reagenzien
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
Aufschluss
Kjeldahl Katalysator (Cu-Se) (1,5 % CuSO
4.5H
2O + 2 % Se) Tabletten, nach Wieninger
172926 1000 g (1000 Tabletten zu je 1,0 g)
3,5 kg (1000 Tabletten zu je 3,5 g)
5 kg (1000 Tabletten zu je 5,0 g)
Kjeldahl Katalysator (Cu) (6,25 % in CuSO4.5H
2O) Tabletten,
nach Richtlinie 93/28/EWG
174428 4 kg (1000 Tabletten zu je 4,0 g)
Schwefelsäure 98 % 173163 1000 ml, 2,5 L
Silicon-Entschäumer 211628 100 ml, 250 ml, 500 ml
Destillation und Auffangen von NH3
Natriumhydroxid-Lösung 40 % (Gew.-%) 171220 1000 ml, 5 L, 10 L, 25 L
Natriumhydroxid-Lösung 32% (Vol.-%) 122666 1000 ml, 2.5 L, 5 L, 10 L, 25 L
Borsäure-Lösung 4 % 282222 1000 ml, 5 L, 25 L
Ammonia Fixative Lösung 1 % 283334 5 L, 25 L
Schwefelsäure 0,25 mol/l (0,5N) 181060 1000 ml, 2,5 L, 10 L
Titration
Natriumhydroxid 0,1 mol/l (0.1N) 181693 1000 ml, 2,5 L, 5 L, 10 L
Schwefelsäure 0,05 mol/l (0.1N) 181061 1000 ml, 5 L, 10 L
Mischindikator 4,8 (Methylrot-Bromocresolgrün) 283303 250 ml
Mischindikator 4,4 (Methylrot-Methylenblau) 282430 250 ml
Methylrot-Lösung 0,1 % 281618 100 ml
Weitere Reagenzien erhältlich!
Mikrobiologie ReAction No.3 11
Verfahren nach ISO 6579:2002 Standard
Beschreibung Bestell-Nr. Menge
Nicht selektive Voranreicherung
Gepuffertes Peptonwasser (ISO 6579:2002) (Vorbereitete Flaschen) 493795.0922 10x100 ml
Gepuffertes Peptonwasser (ISO 6579:2002) (Vorbereitete Flaschen) 493795.0981 3 x 3 L
Gepuffertes Peptonwasser (ISO 6579:2002) (Dehydriertes Kulturmedium) 413795.1210 500 g
Selektive Anreicherung
Rappaport-Vassiliadis (RVS) Broth (ISO 6579:2002) (Dehydriertes Kulturmedium) 414959.1210 500 g
Tetrathionat Broth Base nach Muller-Kauffmann (Dehydriertes Kulturmedium) 414961.1210 500 g
Differenzierende Isolierung auf selektivem Agar
XLD Agar (ISO 6579:2002) (Dehydriertes Kulturmedium) 416270.1210 500 g
XLD Agar (ISO 6579:2002) (Vorbereitete Platte (Ø 90 mm)) 456270.0922 20 Platten
Andere nicht-ISO-konforme Medien
Chromogenic Salmonella Agar (Dehydriertes Kulturmedium) 416110.12134 575 g
Salmonella Chromogenic Medium (Vorbereitete Platte (Ø 90 mm)) 456110.0952 10 Platten
2. Zugabe von Natriumhydroxid-Lösung zur Neutralisation und Überführung von NH
4
+ in NH3
1. Von Schwefelsäure bereits aufgeschlossene
Probe
4. NH3 kondensiert
5. NH3 wird von
Säurelösung aufgefangen (Borsäure, Schwefelsäure
oder Salzsäure)
6. Titration von NH3 mit
volumetrischer Schwefelsäure- oder
Natriumhydroxid-Lösung
3. NH3 wird vom
eingeleiteten Dampf mitgeschleppt
Kjeldahl-Apparatur
Nach der Norm ISO 6579:2002 besteht die Vorgehensweise für die Salmonella-Analyse aus einer nicht selektiven Vor-anreicherung in gepuffertem Peptonwasser und anschließen-dem erneuten Beimpfen von zwei selektiven Anreiche-rungsbouillons (Tetrathionat nach Mueller-Kauffman and Rappaport-Vassiliadis). Danach erfolgt ein Ausstreichen auf Agar, bspw. XLD-Medium oder andere Medien (Hektoen, Salmonella and Shigella, Chromo genic for Salmonella, etc.). Verdächtige Kolonien müssen mit biochemischen und serologischen Tests bestätigt werden.
Non-selective pre-enrichment Buffered Peptone Water ISO11Differential isolation on Selective Agar 33
4
Selective enrichment MKTTn Broth or Rappaport-Vassiliadis Broth ISO22
Chromogenic Salmonella AgarHektoen Enteric Agaretc …
Serological and Biochemical confirmation
XLD Agar ISO
S. enteritidis ATCC 13076 Incubation at 35 ± 2ºC / 24 hours
S. enteritidis ATCC13076
Incubation at 35ºC ± 2ºC24 hours
E.coli ATCC25922 Incubation at 35ºC ± 2ºC
24 hours
Bestimmung von Salmonella sp. nach ISO 6579:2002 in LebensmittelnXLD und Salmonella Chromogenic Agar
top related