Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen
Zytogenetikder Non-Hodgkin-
Lymphome des Kindes- und Jugendalters
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pro-B common prä-B B-ALL T-ALL AUL mixed
Chromosomale Aberrationen bei ALL
Jochen Harbott, Onkogenetisches Labor, Abt. Pädiat. Hämatol./Onkol., Gießen
t(8;14)(q24;q32)
Chromosomale Aberrationen
bei B-NHL/B-ALL
t(8;22)(q24;q11)
t(2;8)(p11;q24)
c-MYC IgH, Ig, Ig
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t(2;5)(p23;q35)
Chromosomale Aberrationen
bei ALCL
Bruchpunkte der Partnerchromosomen bei varianten 2p23-Translokationen
2 5
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Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
Weitere Translokationent(8;14)(q24;q11)t(11;14)(p15;q11)
14q11 TCRa
t(10;14)(q24;q11)
t(1;14)(p32;q11)
inv(14)(q11q32)
t(11;14)(p13;q11)
Partnergene
TAL1 1p32
HOX11 10q24
RHOM2 11p13
TCL1 14q32
MYC 8q24
LMO1 11p15
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Aberrationen in T-Zell-Lymphomen
Aberration Partnergent(1;7)(p34;q35) LCKt(7;10)(q35;q24) HOX11t(7;19)(q35;p13) LYL1
7q35 TCRß
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Genetische Diagnostikklassische Zytogenetik
G-, R-, Q-, C-BandenfärbungMolekulare Zytogenetik
Fluoreszenz in situ Hybridisierung (FISH) Chromosomen-Painting (WCP) Zentromer-Sonden YAC and Cosmid-Sonden 24-Farben-FISH (SKY/M-FISH)
Comparative genomic hybridization (CGH) CGH auf Chromosomen Array CGH
Molekulargenetik Long distance (LD-) PCR reverse transcriptase (RT-) PCR real time quantitative (RQ-) RT-PCR
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Zytogenetik Versand Zellgewinnung
24 Std.-Kultur Zugabe von Colchizin
Herstellung der Präparate Hypotone Phase Fixieren in Alkohol:Eisessig 3:1 Auftropfen
Färbung G-Banden-Färbung
Auswertung Computergesteuerte Bildverarbeitung
Voraussetzung: genügend vitale Zellen
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Nachweis von 8q24-Aberrationen mit break-apart-
Sonde
MYC normal
MYC-Translokation
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24-Farben-FISH
43~45,X,-Y,der(1)t(1;5)(q10;?p10),+der(1)t(1;5)(q10;?p10),del(6)(q15),der(8)t(8;13)(p?;q?)t(8;22)(q24;q11),-10,-15,del(16)(q13),der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp4]/43~45,idem,-der(22)t(8;22)(q24;q11),+mar,inc[cp3]/46,XY[2]
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Tumor-DNA
Referenz-DNA
DNA-VerlustzB Monosomie, Deletion
DNA-ZugewinnzB Trisomie, Duplikation
Comparative Genomic Hybridization (CGH)
Nachweis der Aberration durch Fluoreszenz-Markierung normaler Chromosomen
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Polymerase KettenreaktionPolymerase Chain Reaction (PCR)
94°C
60°C
72°C
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Alternative Methoden zum Nachweis Lymphom-spezifischer
AberrationenInterphase-FISH am Ausstrich/Tupfpräparat oder nach Kultur mit
break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation
Metaphase-FISH nach Kultur mit break-apart-Sonde Nachweis einer MYC- oder ALK-Translokation (und des Partner-
chromosoms)
24-Farben-FISH nach Kultur Nachweis der 8q- oder 2p-Translokation und des Partner-
chromosoms zusätzlich weitere Aberrationen (außer inv, kleinen del oder ins)
Polymerase-Kettenreaktion (LD-PCR, RT-PCR) Nachweis des MYC- oder ALK-Rearrangements und des Fusions-
partners
Comparative genomic hybridization (CGH) Nachweis eines Zugewinns oder Verlustes von Chromosomen-
stücken oder einzelnen Genen
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Probleme bei der zytogenetischen Auswertung
von Lymphomenoft normaler Karyotyp oder kein Ergebnismögliche Ursachen:
keine Proben eingesandt inadäquate Versandbedingungen nicht genügend LymphomzellenKnochenmark ohne Befall kein Tumormaterial eingesandt eingesandtes Material kein Tumor (V.a. Lymphom)Lymphomzellen gehen schnell in Apoptose inadäquate Kulturbedingungen (Medium/Zeit)kryptische Aberrationen
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Häufigkeit unterschiedlicher Karyotypen bei B-NHL
101K aryo typ n orm al
50 ,7 %
d e l(8 )(q24)n = 2
t(2 ;8)n = 2
t(8 ;22)n = 4
t(8 ;14n = 74
m it8q 24 -Ab erration
n = 82
o hne8q 24 -Ab erration
n = 16
98ab errant49 ,3 %
199 P a tien tenm it volls tänd ig em K aryo typ
963 Patienten aus mehreren BFM-NHL Studien
199 vollständige Karyotypen
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Warum Zytogenetik?
spezifische Aberrationen kann man auch mit anderen Methoden nachweisen
Herstellung von Metaphasepräparaten schwierig (Kultur etc.)
Ergebnis fraglich (z.B. normaler Karyotyp)
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Häufigkeit von Sekundäraberrationen
101K aryo typ n orm al
50 ,7 %
d e l(8 )(q24)n = 2
t(2 ;8)n = 2
t(8 ;22)n = 4
t(8 ;14n = 74
n ur8q 24 -Ab erration en
n = 3643 ,9 %
m itS eku nd ärab erration en
n = 4656 ,1 %
m it8q 24 -Ab erration
n = 82
o hne8q 24-Ab erration
n = 16
98ab errant
49 ,3 %
199 P a tien tenm it volls tänd ig em K aryo typ
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Häufigkeit sekundärer Aberrationen bei Burkitt-NHL
43.5201q+
6.53der(3q)
10.956q-
15.27+7/7q+
6.539p-
50.023others
39.118complex
4.32del(17p)
17.4813q-
4.32+12/12q+
8.7411q23
%absaberration
sekundäre Aberrationen mit 8q24
6.211q+
6.21der(3q)
31.356q-
6.21+7/7q+
009p-
75.013others
24.84complex
00del(17p)
6.2113q-
12.52+12/12q+
31.3511q23
%absaberration
Aberrationenohne 8q24
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Häufigkeit von 2p23-Aberrationen bei ALCL
28K aryo typ n orm al
59 ,6 %
t(2 ;5)n = 14
t(1 ;2)n = 1
n ur2p 23 -Ab erration en
n = 3
m itS eku nd ärab erration en
n = 12
m it2p 23 -Ab erration
n = 15
m it2p -A b erration en
n = 1
o hne2p 23 -Ab erration
n = 3
19ab errant
40 ,4 %
47 P a tien tenm it volls tänd ig em K aryo typ
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Sekundäraberrationen bei NHL im Kindesalter
prognostische Bedeutung noch unklar
möglicherweise schlechtere Prognose für einige Aberrationen
Bedeutung für Lymphomentstehung
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Problemlösung
für ein gutes Ergebnis
ausreichend Material verschickengutes Materialmöglichst Tumorgewebe
Gewebe nicht austrocknen lassen vitale Zellen
adäquate Versandbedingungen möglichst sofort versenden innerhalb von 24 Std. im Labor Kurierdienst (Ankunft bis 10.00 Uhr)
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NHL-BFM-MaterialversandKM-Befall und/oder Pleuraerguss
und/oder Aszites nur Tumor
BiopsiePunktion
Diagnosestellung NHL
immunologisch und zytomorphologisch
Diagnosestellung NHL
histologisch und immunhistochemisch
Zytomorphologie / Genetik / Zellbank
Onkogenetisches Labor und
NHL-BFM-StudienzentraleGießen
Immunologie
Immunologisches
Zellmarkerlabor,
Berlin
• Tumormaterial
formalinfixiert
• Tumormaterial in
Medium • Tumortupfpräparate• Liquor, KM, Blut,
Serum
• flüssiges Material
heparinisiert• Zytospinpräparate
bzw. Ausstriche• Liquor, KM, Blut,
Serum
• flüssiges Material
heparinisiert• Zytospinpräparate
bzw. Ausstriche
Histologie / Immunhistochemie
LK-Register, Kiel
oder ein anderes referenzpathologisches Institut
der NHL-BFM-Studie