Protein Engineering und ProteintechnologieE-Learning-Veranstaltung im Sommersemester 2010

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FPLC-Workstation I

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Quelle: GE

Industrieanlage

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Quelle: GE

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Membranadsorber I

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Membranadsorber II

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Affinitätschromatographie

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Fusionsproteine

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Fusionspartner für Affinitätschromatographie

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Affinitätschromatographie

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http://courses.cm.utexas.edu/jrobertus/ch339k/overheads-1/ch5_affinity.jpg www.nonoil.com/bio/engineering/genetic-engineering.files/12-11.jpg

Expressionsvektoren für Bla-Fusionen

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Expressionsvektoren für Bla-Fusionen

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Phenylboronatsepharose

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Reinigung von ββββ-Laktamasefusionsproteinen II

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Periplasmaextrakt

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Affinitätschromatographie an Phenylboronat-Sepharose

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Spaltung des Fusionsproteins mit IgA-Protease

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IgA-Proteasespaltung und Affinitätsreinigung

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Fusionsproteine mit GST

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Proteolytische Prozessierung von Fusionsproteinen

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Dingermann, Tab. 3-1-1

TEV Protease - Glu-Asn-Leu-Tyr-Phe-Gln / Ser -

Metallchelataffinitätschromatographie

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Metallchelataffinitätschromatographie

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Metallchelataffinitätschromatographie

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Metallchelataffinitätschromatographie

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IMAC-Reinigung eines Proteins

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Strepavidin Biotin Komplex

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StrepTag

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StrepTag

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StrepTag

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Single Chain Fv

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StrepTag Screen

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StrepTag Screen

SA AP

BCIP/NBT

Indigo/Formazan

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StrepTag

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Chemische Proteinkonjugation

SA AP

Amin

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Amin

Sulfhydryl

Molekularbiologische Proteinkonjugation

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New England Biolabs

Insulin

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Insulinfreisetzung

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http://www.uni-bonn.de/www/PharmChemBendas/Vorlesung/bilder/Vorlesungen/Diabetes.pdf

Physiologische Wirkung des Insulin

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http://www.uni-bonn.de/www/PharmChemBendas/Vorlesung/bilder/Vorlesungen/Diabetes.pdf

Insulinbedarf

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Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27

Insulin

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Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27

Aufbau von Insulin

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http://www.cryst.bbk.ac.uk/PPS2/course/section11/insulin.html

Proinsulin

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Konversion von Schweineinsulin zu Humaninsulin

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Dingermann Abb. 6-2-3

Funktionsweise von Trypsin

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Katalytische Triade

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Berg, Tymoczko, Stryer, Biochemistry, 5th ed.

Katalytische Triade

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Berg, Tymoczko, Stryer, Biochemistry, 5th ed.

Katalytische Triade

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Katalytische Triade

Threonin

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X

Proteinproduktion in E. coli

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Insulinproduktion in E. coli I

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Insulinproduktion in E. coli als Fusion

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Insulinproduktion in E. coli als Fusion

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Goedell et al. 1979

Insulinproduktion in E. coli als Fusion

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Goedell et al. 1979

Vollsynthese des Gens für HGH

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Goedell et al. 1979b

Vollsynthese des Gens für HGH

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Goedell et al. 1979b

Alles nur geklaut

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Wie Betrug reicht macht: Der Fall Wie Betrug reicht macht: Der Fall SeeburgSeeburg

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Menschliches Wachstumshormon (HGH)

KlonierungKlonierung des HGH Gensdes HGH Gens

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Insulinproduktion in E. coli I

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Insulinproduktion in E. coli I

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Protein-Einschlusskörper (Inclusion Bodies)

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Steinmann et al. (zur Veröffentlichung eingereicht)

Mechanismus der Bromcyanspaltung

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http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1a/CNBr5.png

Oxidative Sufitolyse

2RS--SR+2HSO3- < - - - >2RS--SO3- +2RSH

2RSH+oxidizing agent - - - >RS--SR+2H-oxidizing agent

RS--SR+2HSO3- +oxidizing agent - - - >2RS--SO3- +2H-oxidizing agent (total)

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Oxidative Sufitolyse

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Insulinproduktion in E. coli II

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Dingermann (2001) Pharmazie in unserer Zeit, Vol 30, p. 27